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13.33 : Sang - Biologie


Qu'est-ce que le sang exactement ?

Toutes vos cellules ont besoin d'oxygène, car l'oxygène est l'accepteur final d'électrons pendant la respiration cellulaire. Comment obtiennent-ils cet oxygène? Du sang. Les cellules sanguines circulent dans les vaisseaux du système circulatoire humain. Mais qu'est-ce que le sang exactement ? Il transporte l'oxygène, mais a également d'autres fonctions.

Du sang

Du sang est un tissu conjonctif fluide. Il circule dans tout le corps à travers les vaisseaux sanguins par l'action de pompage du cœur. Le sang dans les artères transporte l'oxygène et les nutriments vers toutes les cellules du corps. Le sang dans les veines transporte le dioxyde de carbone et d'autres déchets loin des cellules pour être excrétés. Le sang défend également le corps contre les infections, répare les tissus corporels, transporte les hormones et contrôle le pH du corps.

Composition du sang

La partie fluide du sang est appelée plasma. C'est un liquide aqueux jaune doré qui contient de nombreuses substances dissoutes et des cellules sanguines. Les types de cellules sanguines dans le plasma comprennent les globules rouges, les globules blancs et les plaquettes (voir Chiffre au dessous de).

Les cellules sanguines comprennent les globules rouges, les globules blancs et les plaquettes.

  • Les milliards de des globules rouges dans le plasma sanguin transportent l'oxygène. Les globules rouges contiennenthémoglobine, une protéine contenant du fer qui se lie à l'oxygène. Les globules rouges sont fabriqués dans la moelle des os longs, les os des côtes, le crâne et les vertèbres. Ces cellules survivent pendant environ 120 jours, puis elles sont détruites. Les globules rouges matures manquent de noyau et d'autres organites, ce qui permet à chaque cellule de transporter plus d'hémoglobine et donc plus d'oxygène.
  • globules blancs sont généralement plus gros que les globules rouges, mais beaucoup moins nombreux. Ils défendent le corps contre les bactéries étrangères, les virus et autres agents pathogènes. Par exemple, les globules blancs appelés phagocytes avaler et détruire les micro-organismes et les débris dans le sang, les neutrophiles engloutissent les bactéries et autres parasites, et les lymphocytes combattent les infections causées par les bactéries et les virus.
  • Plaquettes sont des fragments cellulaires impliqués dans la coagulation du sang. Ils collent aux déchirures des vaisseaux sanguins et les uns aux autres, formant un bouchon sur le site de la blessure. Ils libèrent également des produits chimiques nécessaires à la coagulation.

Groupe sanguin est une caractéristique génétique associée à la présence ou à l'absence de certaines molécules, appelée antigènes, à la surface des globules rouges. Les groupes sanguins les plus connus sont les groupes sanguins ABO et Rhésus.

  • Groupe sanguin ABO est déterminé par deux antigènes communs, souvent appelés simplement antigènes A et B. Une personne peut avoir le groupe sanguin A (uniquement l'antigène A), B (uniquement l'antigène B), AB (les deux antigènes) ou O (pas d'antigène).
  • Groupe sanguin rhésus est déterminé par un antigène commun. Une personne peut soit avoir l'antigène (Rh+) ou manquent de l'antigène (Rh-).

Le groupe sanguin est important pour des raisons médicales. Une personne qui a besoin d'une transfusion sanguine doit recevoir du sang du même type que le sien. Sinon, le sang transfusé peut provoquer une réaction potentiellement mortelle dans la circulation sanguine du patient.

Sommaire

  • Le sang est un tissu conjonctif fluide qui contient un composant liquide appelé plasma.
  • Le sang contient également des substances dissoutes et des cellules sanguines.
  • Les globules rouges transportent l'oxygène, les globules blancs défendent le corps et les plaquettes aident le sang à coaguler.

Revoir

  1. Quel type de tissu est le sang ?
  2. Identifiez trois types de cellules sanguines et leurs fonctions.
  3. Les personnes de groupe sanguin O sont appelées « donneurs universels » car elles peuvent donner du sang à n'importe qui d'autre, quel que soit leur groupe sanguin ABO. Expliquer pourquoi.

Système de groupe sanguin H

Marion E. Reid PhD, FIBMS, DSc (Hon.) , . Martin L. Olsson MD, PhD , dans The Blood Group Antigen FactsBook (troisième édition) , 2012

Bases moléculaires du phénotype H– dans les sécrétions

Différences avec le FUT2 *01 allèle de référence (numéro d'accès U17894) sont donnés.

Nom de l'allèleExonNucléotideAcide aminéEthnicité (prévalence)
FUT2*01N.012244G>A 385A>TAla82Thr Ile129PheMongol (Rare)
FUT2*01N.022428G>A ^ Trp143ArrêtEuropéens, Africains, Iraniens (Commun)
FUT2*01N.032569G>AArg190HisTurc (Rare)
FUT2*01N.042571C>TArg191ArrêterJaponais, Philippin Polynésien, Taïwanais (Rare)
FUT2*01N.052628C>TArg210ArrêtJaponais (Rare)
FUT2*01N.062658C>TArg220ArrêtChinois, Taïwanais (Rare)
FUT2*01N.072664C>TArg222CysNéo-guinéen (Rare)
FUT2*01N.082685_686delGT230fs234 ArrêtTaïwanais (Rare)
FUT2*01N.092688_690delGTCVal230delPhilippin (Rare)
FUT2*01N.102400G>A 760G>AVal134Ile Asp254AsnNéo-guinéen (Rare)
FUT2*01N.112778delC259fs275ArrêtSud-Africain (Rare)
FUT2*01N.122849G>ATrp283ArrêtPhilippin, Taïwanais (Rare)
FUT2*01N.132868G>AGly290ArgNéo-guinéen (Rare)
FUT2*01N.142950C>TPro317LeuMongol (Rare)
FUT2*0N.01 suppression de gène Bangladais (Rare)
FUT2*0N.02 région de codage supprimée ^^ Indien (plusieurs)
FUT2*0N.03 gène de fusion 1 entre FUT2 et Sec1 Japonais (Rare)
FUT*0N.04 gène de fusion 2 entre FUT2 et Sec1 Mongol (Rare)

Biochimie des Glycans Glycoconjugués Interactions Induites par les Glucides

3.03.10.1 α2-Fuc-Transférases

FUT1, codé par le gène H dans les tissus hématopoïétiques, et FUT2, codé par le gène de sécrétion Se dans les cellules épithéliales et sécrétant du mucus, synthétisent le déterminant H (groupe sanguin O). 199 200 FUT1 et -2 agissent sur le résidu Gal de N-acétyllactosamines. Cependant, FUT2 préfère la structure core 1 comme substrat et est donc responsable de la synthèse de l'antigène H dans les mucines. En raison de la spécificité des Fuc-transférases, le résidu Fucα1-2 est ajouté au NL'extrémité -acétyllactosamine avant qu'un résidu Fucα1-3 ou Fucα1-4 ne soit ajouté dans la synthèse des déterminants de Lewis b ou de Lewis y (figures 4 et 5). La plupart des gens ont le déterminant H, mais dans les rares phénotypes Bombay et para-Bombay (tableau 7), le déterminant du groupe sanguin H est absent en raison de défauts dans les 2-Fuc-transférases. 201 202

L'activité de FUT1 est augmentée dans les tumeurs coliques et est associée à la progression tumorale. 203 Lorsque FUT1 a été transfecté dans des cellules REGb de carcinome du côlon de rat, les cellules sont devenues plus agressives et tumorigènes chez les rats syngéniques, probablement en raison d'une résistance accrue à l'apoptose. 204 souris transgéniques FUT1 présentent une colite et une lymphopénie ainsi que des marqueurs cellulaires T aberrants qui pourraient être reconstitués avec une greffe de moelle osseuse de souris de type sauvage. 205 Cela montre que FUT1 est impliqué de manière critique dans le développement des lymphocytes T. Une délétion du gène FUT2 chez la souris (tableau 6) a éliminé l'épitope Fucα1-2Gal dans les mucines gastro-intestinales mais n'a induit aucune pathologie. 206 Chez les souris sans germe, il a été démontré que les microbes fécaux oraux induisaient une expression élevée de FUT2 spécifiquement dans l'intestin grêle, suggérant des interactions hôte-microbe comme facteur inducteur. 207


Résultats et discussion

Pour générer le Tbx1-GFP allèle, nous avons d'abord généré un plasmide bactérien qui exprime une protéine de fusion Tbx1-GFP d'environ 75 kilodaltons (kD) (Figure 1A), correspondant à la masse combinée de Tbx1 (

27 kD) (Figure 1B). Les Tbx1-GFP fragment a été inséré en aval d'une séquence d'arrêt transcriptionnelle de triple polyadénylation (tpA) qui est flanquée de sites LoxP dans le vecteur pBigT [13]. L'élément loxP-tpA-loxP-Tbx1-GFP a été cloné dans le vecteur pROSA26PA pour cibler le Rosa26 locus [13, 14] et électroporation dans des cellules souches embryonnaires de souris (ESC) de la 6e guerre mondiale (129/SvJ). Nous avons identifié 5/56 clones ESC correctement ciblés par analyse Southern blot (Figure 1C). Le clone 45 a été choisi pour l'injection de blastocystes dans des femelles C57BL6 afin de générer des chimères pour la transmission germinale.

Génération de la Tbx1-GFP Souris. (UNE) La Tbx1-GFP a été insérée dans le site de clonage multiple (MCS) de pBigT en aval d'une triple séquence de polyadénylation (tpA) qui est flanquée de sites LoxP (triangles). Un sous-clonage supplémentaire dans le plasmide pROSA26PA a donné la construction de ciblage finale. Les bras d'homologie 5' et 3' médient la recombinaison avec l'endogène Rosa26 lieu. (B) Lysats de cellules entières de cellules COS7 transfectées (T) avec le plasmide Tbx1-GFP ou non transfectées (UT). La protéine de fusion est 75 kD et est détectée par anti-GFP et anti-Tbx1 sur Western blot. (C) Le transfert de Southern a été utilisé pour cribler les clones ESC. L'ADN génomique a été linéarisé avec EcoRV et hybride avec une sonde radiomarquée qui se lie en amont du bras d'homologie 5'. Deux des cinq clones positifs sont présentés. L'allèle correctement ciblé est de 4 071 pb et l'allèle de type sauvage est de 11 517 kb.

Pour tester le Tbx1-GFP allèle, nous avons croisé Tbx1-GFP flox/flox souris à Foxg1-Cre et Pax2-Cre souris [15, 16] et analysé leurs phénotypes respectifs. Les deux pilotes Cre ont déjà été utilisés pour inactiver Tbx1 par recombinaison tissu-spécifique des sites loxP [11, 17]. Foxg1-Cre l'expression se chevauche avec l'endogène Tbx1 expression dans des tissus tels que l'appareil pharyngé et la vésicule otique (OV) [11, 15, 17]. Dans l'étude présentée ici, nous montrons que Foxg1-Cre peut activer ectopiquement Tbx1-GFP dans la placode olfactive, le cerveau antérieur et la vésicule optique entraînant des défauts morphologiques de ces tissus au cours du développement (figure 2A). De plus, par E15.5, Foxg1-CreTbx1-GFP flox/+ les mutants présentent une aplasie thymique probablement due à une surexpression de Tbx1-GFP dans la 3 e poche pharyngée, et formation anormale de la proéminence nasale. Pax2-CreTbx1-GFP flox/+ les mutants sont létaux périnatals (figure 2A).

Activation de Tbx1-GFP par Foxg1-Cre et Pax2-Cre . (UNE) Foxg1-CreTbx1-GFP flox/+ les mutants ont une aplasie thymique et des malformations nasales à E15.5, et des défauts oculaires et pharyngés à E11.5. (B) Pax2-CreTbx1-GFP flox/+ les mutants meurent peu après la naissance. Ils ont une microcéphalie et des défauts oculaires. Thymus (T), cœur (H), poumons (L), cerveau antérieur (FB). (C) Remplissage de peinture des oreilles internes dans Pax2-CreTbx1-GFP flox/+ et Foxg1-CreTbx1-GFP flox/+ mutants. Le canal endolymphatique (ED) et le pilier commun (CC) sont élargis. Le canal semi-circulaire latéral (LC), l'utricule (U) et le saccule (S) sont manquants. La cochlée (C) est raccourcie à des degrés divers. Les souris BAC316.23 présentent des similitudes dans les défauts morphologiques de l'oreille interne. Canal antérieur (AC), canal postérieur (PC). (RÉ) ARN entier in situ hybridation à E9.5 pour NeuroD, exprimé dans les neuroblastes des ganglions crâniens. L'immunohistochimie Wholemount colore les ganglions sensoriels crâniens avec un anti-neurofilament (NF) à E10.5. Les parenthèses rouges indiquent la placode olfactive. La vésicule otique est entourée en jaune.

Étant donné que les anomalies de l'oreille interne et du cœur sont deux des caractéristiques les plus importantes de la Tbx1 mutant nul, nous avons décidé d'examiner ces structures plus en détail dans le Pax2-CreTbx1-GFP flox/+ mutants et Foxg1-CreTbx1-GFP flox/+ mutants, respectivement. Foxg1-Cre et Pax2-Cre sont tous deux fortement exprimés tout au long de la VO, à partir de laquelle se forme l'oreille interne. Tant la perte que le gain de Tbx1 la fonction dans l'OV perturbe la morphogenèse de l'oreille interne [5, 18, 19]. Remplissage de peinture de l'oreille interne dans Foxg1-CreTbx1-GFP flox/+ et Pax2-CreTbx1-GFP flox/+ mutants à E14.5 montre un conduit endolymphatique agrandi (ED) et crus commun (CC) qui rejoint les canaux semi-circulaires antérieur et postérieur (SCC) (Figure 2B). L'utricule, le saccule et le SCC latéral sont absents. La cochlée est hypoplasique à des degrés divers, mais agrandie dans deux cas (figure 2B). Ce phénotype est très similaire à celui des souris transgéniques BAC316.23 [5] à l'exception que les souris BAC316.23 possèdent toujours le SCC latéral, et dans la plupart des cas, le saccule et l'utricule sont présents, bien que malformés (Figure 2B).

Tbx1 est également connu pour réprimer la neurogenèse du VIIIe ganglion crânien qui innerve l'oreille interne [19]. Ici, nous montrons que dans Foxg1-CreTbx1-GFP flox/+ mutants, expression de Facteur de différenciation neurogène 1 (NeuroD) est presque aboli dans le VIIIe ganglion crânien et très atténué dans les ganglions crâniens V, VII, IX et X (Figure 2C). L'immunohistochimie avec anti-neurofilament a confirmé la perte du VIIIe ganglion crânien et une taille anormale et des projections erronées d'autres ganglions crâniens dans Foxg1-CreTbx1-GFP flox/+ mutants (figure 2C). De plus, nous avons constaté que NeuroD l'expression est complètement absente de la placode olfactive de Foxg1-CreTbx1-GFP flox/+ mutants une région où Foxg1-Cre est actif et il n'y a pas Tbx1 expression dans un contexte de type sauvage suggérant que le gain de fonction de Tbx1 dans la placode olfactif conduit à une répression ectopique de NeuroD. Ces résultats démontrent que Tbx1 pourrait agir directement ou indirectement sur des facteurs neurogènes communs aux placodes otiques et olfactifs.

Examen des défauts du CCN dans le Pax2-CreTbx1-GFP flox/+ les mutants utilisant le remplissage de peinture ont révélé un retard dans la formation de SCC à des stades de développement antérieurs (figure 3A). Dans le type sauvage, la clairance des plaques de fusion est visible par E12.25 et complète par E12.5 [20]. Dans Pax2-CreTbx1-GFP flox/+ mutants, les plaques de fusion ne se sont pas encore jointes à E12.25 bien qu'elles semblent récupérer partiellement par E14.5 (figure 3A). Les coupes histologiques à E12.25 confirment que les plaques de fusion dans Pax2-CreTbx1-GFP flox/+ les mutants restent attachés au mésenchyme périotique par rapport aux congénères de contrôle (figure 3A). Nous avons examiné l'expression de la laminine et nétrine-1, une protéine sécrétée qui est liée aux laminines et favorise la dégradation de la lame basale [21, 22]. Nous avons observé une diminution des niveaux de protéine laminine le long de l'épithélium otique, en particulier le long du site de formation latérale du CSC, ainsi qu'une diminution correspondante de nétrine-1 Expression de l'ARNm le long des plaques de fusion dans Pax2-CreTbx1-GFP flox/+ mutants (figure 3B). Il est possible que Tbx1 peut agir pour réprimer nétrine-1, modulant ainsi les propriétés d'adhésion cellulaire. La complémentation de ces résultats a eu lieu dans Tbx1 −/− souris nulles dans lesquelles l'expression de nétrine-1 est élargi dans le mésenchyme entourant l'OV (figure 3C). Nous n'avons pas observé d'expansion nétrine-1 expression dans la VO de Tbx1 −/− souris nulles, probablement en raison de la sévérité du phénotype OV et de l'absence subséquente de structures vestibulaires.

Propriétés d'adhésion cellulaire altérées dans Tbx1 mutants. (UNE) Remplissage de peinture des oreilles internes de Pax2-CreTbx1-GFP flox/+ des mutants à des stades de développement de plus en plus précoces révèlent un retard dans la formation de SCC. A E12.25, des plaques de fusion (flèches, FP) sont visibles dans les contrôles, mais ne semblent pas s'être formées dans les mutants. L'analyse histologique confirme des défauts dans les plaques de fusion (FP, flèches rouges). Chez les témoins, on peut voir que l'épithélium vestibulaire s'est séparé du mésenchyme (astérisques). Dans Tbx1-GFP mutants, il n'y a pas de séparation de l'épithélium des tissus environnants. (B) Immunofluorescence avec anti-laminine (rouge). Les flèches indiquent l'étendue de l'épithélium de la plaque de fusion. Il y a plus de laminine intacte dans le Tbx1-GFP mutants. ARN in situ hybridation à nétrine-1 sur les rubriques. Nétrine-1 l'expression est réduite dans les plaques de fusion de Tbx1-GFP mutants. Canal antérieur (AC, canal latéral (LC). (C) Expression de nétrine-1 ARNm sur type sauvage et Tbx1 −/− souris nulles. Nétrine-1 l'expression est augmentée dans le mésenchyme entourant l'oreille interne en l'absence de Tbx1.

Pour tester si Tbx1-GFP pourrait sauver les défauts de l'oreille interne qui se produisent dans Tbx1 Cré/- embryons nuls, nous avons croisé Tbx1-GFP flox/flox souris à Tbx1 Cré/+ souris [23]. Tbx1 Cré/- il a été démontré que les souris récapitulent les Tbx1 −/− phénotype nul [23]. Lorsque Cre est exprimé, les cellules du Tbx1 Cré/+ exprimant le domaine sont positifs pour la GFP d'une manière qui représente le Tbx1 lignée dans l'OV dans les embryons (figure 4A). Expression de Tbx1-GFP sous le Rosa26 le promoteur seul n'est pas suffisant pour la visualisation directe de la GFP naturelle, par conséquent la protéine Tbx1-GFP a été détectée à l'aide d'un anticorps contre la GFP. Depuis l'expression de Tbx1-GFP est constamment entraîné par l'endogène Rosa26 promoteur, nous nous attendons à ce que le domaine de activé Tbx1-GFP être plus étendu que natif Tbx1 expression (figure 4A). L'immunofluorescence avec un antisérum anti-GFP a démontré qu'il n'y a pas de protéine Tbx1-GFP en l'absence d'expression de Cre dans l'OV (figure 4A). Tbx1 Cré/+ Tbx1-GFP flox/+ les mutants ne présentaient pas de défauts morphologiques bruts de l'oreille interne basés sur le remplissage de peinture (figure 4B), peut-être parce qu'un allèle de Tbx1 est enlevé par knock-in de Cré. Le remplissage de peinture a confirmé que les oreilles internes de Tbx1 −/− les souris null n'ont pas toutes les structures vestibulaires et auditives discernables à l'exception de ce qui semble être un ED agrandi (figure 4C). Lorsqu'un seul allèle de Tbx1-GFP est activé dans un Tbx1 Cré/- arrière-plan, il y a sauvetage des CSC antérieurs et postérieurs dans tous les embryons, et sauvetage partiel du saccule et de la cochlée (n = 6) (figure 4C). Le sauvetage complet du phénotype nul n'est pas attendu avec l'activation constitutive de Tbx1-GFP parce que la régulation temporelle de Tbx1 est nécessaire au développement normal de l'oreille interne.

Activation de Tbx1-GFP dans l'oreille interne en utilisant Tbx1 Cré/+ . (UNE) Immunofluorescence avec des anticorps GFP (rouge) et Tbx1 (rouge) sur des coupes transversales E10.5 à travers la vésicule otique (OV). Le VIIIème ganglion crânien, également connu sous le nom de ganglion cochléovestibulaire (CVG) est adjacent à l'OV. Tube neural (NT). (B) Activation de Tbx1-GFP par Tbx1 Cré/+ ne produit pas de défauts morphologiques majeurs de l'oreille interne, comme visualisé par le remplissage de peinture à E14.5. (C) Le remplissage de peinture montre un échec de la morphogenèse de l'oreille interne dans Tbx1 Cré/- souris nulles à E14,5 par rapport aux Tbx1-GFP flox/+ contrôler. Activation d'un seul allèle de Tbx1-GFP sur un Tbx1 Cré/- le fond nul est capable de sauver partiellement la morphogenèse.

Les Tbx1 Cré/+ allèle a également été utilisé pour activer Tbx1-GFP dans d'autres sites endogènes d'expression de Tbx1 tels que le mésoderme pharyngé, y compris le champ cardiaque secondaire (figure 5A). Analyse histologique de Tbx1 Cré/+ Tbx1GFP flox/+ les embryons à E14.5 ont montré un développement cardiaque normal (Figure 5B). Le génotypage des souris à P10 a confirmé la présence de vivants Tbx1 Cré/+ Tbx1GFP flox/+ souris dans des rapports mendéliens normaux (figure 5B). En revanche, les souris qui ont à la fois Tbx1-GFP allèles activés par Tbx1 Cré/+ ne sont pas viables (Figure 5B), nous incitant à évaluer le phénotype cardiaque dans Tbx1 Cré/+ Tbx1GFP flox/flox embryons à E14.5. Tbx1 Cré/+ Tbx1GFP flox/flox les embryons présentaient des défauts tels que le tronc artériel persistant (PTA, 2/5 embryons) et le ventricule droit à double sortie (DORV, 3/5 embryons), tous avec des défauts septaux ventriculaires (VSD, 5/5 embryons) (Figure 5C). Surexpression de TBX1 a déjà été associé à VSD dans

10 % des souris transgéniques BAC316.23 [2]. Les malformations cardiaques peuvent expliquer la létalité périnatale de Tbx1 Cré/+ Tbx1GFP flox/flox souris. Nous voulions comparer les niveaux d'expression protéique de la protéine de fusion Tbx1-GFP activée dans le domaine Tbx1 par rapport à la protéine Tbx1 endogène. Pour ce faire, nous avons effectué un western blot sur des échantillons de tissus (figure 5D) et observé que le niveau de protéine Tbx1-GFP exprimé à partir d'un seul allèle était plus élevé que celui observé pour Tbx1 de type sauvage endogène. Cependant, cela peut refléter le plus grand domaine d'expression de Tbx1-GFP dans la lignée cellulaire qui est marqué par Tbx1 Cré/+ .

Effets posologiques de Tbx1-GFP activation sur le développement cardiaque. (UNE) L'immunofluorescence avec un anticorps GFP montre l'activation de Tbx1-GFP par Tbx1 Cré/+ à E9.5. La GFP est détectée dans la vésicule otique postérieure (OV), les 1 er et 2 e arcs branchiaux (BA1, BA2) et le mésoderme, y compris le champ cardiaque secondaire proximal à la voie d'éjection (OFT). (B) Les coupes transversales histologiques à E14,5 montrent que Tbx1 Cré/+ Tbx1-GFP flox/+ les mutants n'ont pas de voies d'éjection ou de défauts ventriculaires. Ils survivent dans des rapports mendéliens normaux, contrairement Tbx1 Cré/+ Tbx1-GFP flox/flox mutants non viables. (C) Activation des deux allèles de Tbx1-GFP par Tbx1 Cré/+ provoque des défauts de cloisonnement des voies d'éjection (artériose persistante du tronc, PTA) et d'alignement (ventricule droit à double sortie, DORV) avec communication interventriculaire (VSD). (RÉ) Western blot de protéines isolées des régions pharyngées E9.5 pour comparer les niveaux d'expression des protéines de Tbx1-GFP et de Tbx1 endogène. Pour chaque génotype, nous avons regroupé 4 embryons (stade 23 à 24 somites) et chargé des quantités égales de protéines par piste. La même membrane a été sondée avec des anticorps anti-Tbx1 et -actine. La taille attendue de Tbx1 endogène est 50 kD tandis que la protéine de fusion Tbx1-GFP est 75 kD. La -actine est détectée à 40 kD.

Ensuite, nous voulions tester si Tbx1-GFP pouvait également sauver les défauts cardiaques qui se produisent dans Tbx1 Cré/- embryons (Figure 6A), qui ont tous PTA et VSD (n = 3) [12]. Analyse de Tbx1 Cré/- Tbx1GFP flox/+ les embryons à E14.5 ont montré un sauvetage complet des défauts de cloisonnement de la voie d'éjection (n = 8), bien que 50 % aient encore un désalignement de la voie d'éjection entraînant une DORV (figure 6B). Le VSD a été observé dans tous Tbx1 Cré/- Tbx1GFP flox/+ embryons. Il n'est pas clair si ces défauts sont dus à l'impossibilité de secourir le Tbx1 phénotype nul, ou s'ils sont dus à une surexpression de Tbx1-GFP protéine (figure 5D), même si les niveaux d'expression de la protéine tels que détectés par western blot ne fournissent pas d'informations sur les niveaux d'activité fonctionnelle de la protéine Tbx1-GFP. Il est également possible que l'échec d'un sauvetage complet soit dû au fait que Tbx1-GFP s'exprime constitutivement sous le contrôle du Rosa26 promoteur et n'est donc pas soumis à une régulation temporelle. Activation des deux Tbx1-GFP allèles dans Tbx1 Cré/- Tbx1GFP flox/flox embryons ont entraîné des phénotypes cardiaques plus sévères, y compris PTA dans 5/6 embryons en plus de VSD (Figure 6C) en raison d'autres Tbx1 déséquilibre du dosage des gènes.

Tbx1-GFP peut partiellement sauver endogène Tbx1 Cré/- perte de fonction. Coupes transversales histologiques du cœur à E14,5. (UNE) Tbx1 Cré/- les souris sont fonctionnellement nulles et ont PTA et VSD. Tbx1 Cré/+ Tbx1-GFP flox/+ les mutants sont viables avec une histologie cardiaque normale. (B) Tbx1 Cré/- Tbx1-GFP flox/+ les mutants présentent un sauvetage complet de la cloison des voies d'éjection bien que la moitié des embryons aient un ventricule droit à double sortie (DORV). (C) Tbx1 Cré/- Tbx1-GFP flox/flox les mutants ont tous une communication interventriculaire (VSD), principalement avec un tronc artériel persistant (PTA) et un exemple de DORV.


Contenu

La biosynthèse du glutathion implique deux étapes dépendantes de l'adénosine triphosphate :

  • D'abord, gamma-glutamylcystéine est synthétisée à partir de L-glutamate et cystéine. Cette conversion nécessite l'enzyme glutamate-cystéine ligase (GCL, glutamate cystéine synthase). Cette réaction est l'étape limitante de la synthèse du glutathion. [3]
  • Deuxièmement, la glycine est ajoutée à l'extrémité C-terminale de gamma-glutamylcystéine. Cette condensation est catalysée par la glutathion synthétase.

Alors que toutes les cellules animales sont capables de synthétiser le glutathion, la synthèse du glutathion dans le foie s'est avérée essentielle. Les souris knock-out GCLC meurent dans le mois suivant la naissance en raison de l'absence de synthèse hépatique de GSH. [4] [5]

La liaison gamma-amide inhabituelle dans le glutathion le protège de l'hydrolyse par les peptidases. [6]

Occurrence Modifier

Le glutathion est le thiol le plus abondant dans les cellules animales, allant de 0,5 à 10 mM. Il est présent à la fois dans le cytosol et les organites. [6]

Les humains synthétisent le glutathion, mais pas quelques eucaryotes, dont les Fabaceae, Entamoeba, et Giardia. Les seules archées qui fabriquent du glutathion sont les halobactéries. Certaines bactéries, telles que les cyanobactéries et les protéobactéries, peuvent biosynthétiser le glutathion. [7] [8]

Le glutathion existe à l'état réduit (GSH) et oxydé (GSSG). Le rapport du glutathion réduit au glutathion oxydé dans les cellules est une mesure du stress oxydatif cellulaire [9] [10] où l'augmentation du rapport GSSG-à-GSH indique un stress oxydatif plus important. Dans les cellules et les tissus sains, plus de 90 % du pool total de glutathion est sous forme réduite (GSH), le reste sous forme disulfure (GSSG). [11]

A l'état réduit, le groupe thiol du résidu cystéinyle est une source d'un équivalent réducteur. Du disulfure de glutathion (GSSG) est ainsi généré. L'état oxydé est converti en état réduit par le NADPH. [12] Cette conversion est catalysée par la glutathion réductase :

NADPH + GSSG + H2O → 2 GSH + NADP + + OH −

Antioxydant Modifier

Le GSH protège les cellules en neutralisant (c'est-à-dire en réduisant) les espèces réactives de l'oxygène. [13] [6] Cette conversion est illustrée par la réduction des peroxydes :

2 GSH + R2O2 → GSSG + 2 ROH (R = H, alkyle)

Règlement Modifier

Outre la désactivation des radicaux et des oxydants réactifs, le glutathion participe à la protection des thiols et à la régulation redox des protéines thiol cellulaires sous stress oxydatif par la protéine S-glutathionylation, une modification post-traductionnelle du thiol régulée par redox. La réaction générale implique la formation d'un disulfure asymétrique à partir de la protéine protégeable (RSH) et du GSH : [14]

Le glutathion est également utilisé pour la détoxification du méthylglyoxal et du formaldéhyde, des métabolites toxiques produits sous stress oxydatif. Cette réaction de détoxification est réalisée par le système glyoxalase. La glyoxalase I (EC 4.4.1.5) catalyse la conversion du méthylglyoxal et du glutathion réduit en S--lactoyl-glutathion. La glyoxalase II (EC 3.1.2.6) catalyse l'hydrolyse de S--lactoyl-glutathion en glutathion et -acide lactique.

Il maintient les antioxydants exogènes tels que les vitamines C et E dans leurs états réduits (actifs). [15] [16] [17]

Métabolisme Modifier

Parmi les nombreux processus métaboliques auxquels il participe, le glutathion est nécessaire à la biosynthèse des leucotriènes et des prostaglandines. Il joue un rôle dans le stockage de la cystéine. Le glutathion améliore la fonction de la citrulline dans le cadre du cycle de l'oxyde nitrique. [18] C'est un cofacteur et agit sur la glutathion peroxydase. [19]

Conjugaison Modifier

Le glutathion facilite le métabolisme des xénobiotiques. Les enzymes glutathion S-transférase catalysent sa conjugaison aux xénobiotiques lipophiles, facilitant leur excrétion ou leur métabolisme ultérieur. [20] Le processus de conjugaison est illustré par le métabolisme de N-acétyle-p-benzoquinone imine (NAPQI). NAPQI est un métabolite réactif formé par l'action du cytochrome P450 sur le paracétamol (acétaminophène). Le glutathion se conjugue à NAPQI, et l'ensemble résultant est excrété.

Neurotransmetteurs potentiels Modifier

Le glutathion, ainsi que le glutathion oxydé (GSSG) et le S-nitrosoglutathion (GSNO), se lient au site de reconnaissance du glutamate des récepteurs NMDA et AMPA (via leurs fragments γ-glutamyl). Le GSH et le GSSG peuvent être des neuromodulateurs. [21] [22] [23] À des concentrations millimolaires, le GSH et le GSSG peuvent également moduler l'état redox du complexe récepteur NMDA. [22] Le glutathion se lie et active les récepteurs ionotropes, ce qui en fait potentiellement un neurotransmetteur. [24]

Le GSH active le récepteur purinergique P2X7 de Müller glia, induisant des signaux transitoires de calcium aigus et la libération de GABA à la fois par les neurones rétiniens et les cellules gliales. [25] [26]

Dans les plantes Modifier

Chez les plantes, le glutathion est impliqué dans la gestion du stress. C'est un composant du cycle glutathion-ascorbate, un système qui réduit le peroxyde d'hydrogène toxique. [27] C'est le précurseur des phytochélatines, oligomères de glutathion qui chélatent les métaux lourds comme le cadmium. [28] Le glutathion est nécessaire pour une défense efficace contre les agents pathogènes des plantes tels que Pseudomonas syringae et Phytophthora brassicae. [29] L'adénylyl-sulfate réductase, une enzyme de la voie d'assimilation du soufre, utilise le glutathion comme donneur d'électrons. D'autres enzymes utilisant le glutathion comme substrat sont les glutarédoxines. Ces petites oxydoréductases sont impliquées dans le développement des fleurs, l'acide salicylique et la signalisation de défense des plantes. [30]

La biodisponibilité systémique du glutathion consommé par voie orale est faible car le tripeptide est le substrat des protéases (peptidases) du tube digestif, et en raison de l'absence d'un transporteur de glutathion au niveau de la membrane cellulaire. [31] [32] Dans une autre étude, les chercheurs ont rapporté que la supplémentation en glutathion à long terme offre une protection contre les dommages oxydatifs. Dans cette étude, une supplémentation orale de 500 mg de GSH a non seulement augmenté le GSH érythrocytaire, mais a également diminué de manière significative la 8-OHdG en trois mois chez les personnes diabétiques âgées (âgées de plus de 55 ans) [33]

Étant donné que la supplémentation directe en glutathion n'est pas efficace, l'approvisionnement en matières premières nutritionnelles utilisées pour générer du GSH, telles que la cystéine et la glycine, peut être plus efficace pour augmenter les niveaux de glutathion. D'autres antioxydants tels que l'acide ascorbique (vitamine C) peuvent également agir en synergie avec le glutathion, empêchant l'épuisement de l'un ou l'autre. Le cycle glutathion-ascorbate, qui agit pour détoxifier le peroxyde d'hydrogène (H2O2), est un exemple très précis de ce phénomène.

Il a été démontré que la supplémentation orale en gamma-glutamylcystéine augmente efficacement les niveaux de glutathion cellulaire. [34]

De plus, des composés tels que la N-acétylcystéine [35] (NAC) et l'acide alpha lipoïque [36] (ALA, à ne pas confondre avec l'acide alpha-linolénique non apparenté) sont tous deux capables d'aider à régénérer les niveaux de glutathion. La NAC, en particulier, est couramment utilisée pour traiter une surdose d'acétaminophène, un type d'empoisonnement potentiellement mortel qui est nocif en partie en raison d'un grave épuisement des niveaux de glutathion. C'est un précurseur de la cystéine.

Calcitriol (1,25-dihydroxyvitamine D3), le métabolite actif de la vitamine D3, après avoir été synthétisé à partir du calcifédiol dans le rein, augmente les niveaux de glutathion dans le cerveau et semble être un catalyseur pour la production de glutathion. [37] Une dizaine de jours sont nécessaires à l'organisme pour assimiler la vitamine D3 en calcitriol. [38]

S-adénosylméthionine (SAMe), un cosubstrat impliqué dans le transfert de groupes méthyle, a également été montré pour augmenter la teneur en glutathion cellulaire chez les personnes souffrant d'une déficience en glutathion liée à la maladie. [39] [40] [41]

Un faible taux de glutathion est couramment observé dans le gaspillage et le bilan azoté négatif, comme dans le cancer, le VIH/SIDA, la septicémie, les traumatismes, les brûlures et le surentraînement sportif. De faibles niveaux sont également observés en période de famine. Ces effets sont supposés être influencés par l'activité glycolytique plus élevée associée à la cachexie, qui résulte de niveaux réduits de phosphorylation oxydative. [42] [43]

Réactif d'Ellman et monobromobimane Modifier

Le glutathion réduit peut être visualisé en utilisant le réactif d'Ellman ou des dérivés de bimane tels que le monobromobimane. La méthode au monobromobimane est plus sensible. Dans cette procédure, les cellules sont lysées et les thiols extraits à l'aide d'un tampon HCl. Les thiols sont ensuite réduits au dithiothréitol et marqués au monobromobimane. Le monobromobimane devient fluorescent après liaison au GSH. Les thiols sont ensuite séparés par HPLC et la fluorescence quantifiée avec un détecteur à fluorescence.

Monochlorobimane Modifier

A l'aide de monochlorobimane, la quantification se fait par microscopie confocale à balayage laser après application du colorant sur des cellules vivantes. [44] Ce processus de quantification repose sur la mesure des taux de changements de fluorescence et est limité aux cellules végétales.

Le CMFDA a également été utilisé à tort comme sonde de glutathion. Contrairement au monochlorobimane, dont la fluorescence augmente lors de la réaction avec le glutathion, l'augmentation de la fluorescence du CMFDA est due à l'hydrolyse des groupes acétate à l'intérieur des cellules. Bien que le CMFDA puisse réagir avec le glutathion dans les cellules, l'augmentation de la fluorescence ne reflète pas la réaction. Par conséquent, les études utilisant le CMFDA comme sonde de glutathion devraient être revisitées et réinterprétées. [45] [46]

ThiolQuant Vert Modifier

La principale limitation de ces sondes à base de bimane et de nombreuses autres sondes rapportées est que ces sondes sont basées sur des réactions chimiques irréversibles avec le glutathion, ce qui rend ces sondes incapables de surveiller la dynamique du glutathion en temps réel. Récemment, la première sonde fluorescente basée sur une réaction réversible - ThiolQuant Green (TQG) - pour le glutathion a été signalée. [47] ThiolQuant Green peut non seulement effectuer des mesures à haute résolution des niveaux de glutathion dans des cellules individuelles à l'aide d'un microscope confocal, mais également être appliqué en cytométrie de flux pour effectuer des mesures en vrac.

RealThiol Modifier

La sonde RealThiol (RT) est une sonde GSH à réaction réversible de deuxième génération. Quelques caractéristiques clés de RealThiol : 1) il a une cinétique de réaction avant et arrière beaucoup plus rapide par rapport à ThiolQuant Green, qui permet une surveillance en temps réel de la dynamique du GSH dans les cellules vivantes 2) seul le RealThiol micromolaire à sub-micromolaire est nécessaire pour la coloration dans expériences basées sur les cellules, qui induisent une perturbation minimale du niveau de GSH dans les cellules 3) un fluorophore de coumarine à haut rendement quantique a été mis en œuvre afin que le bruit de fond puisse être minimisé et 4) la constante d'équilibre de la réaction entre RealThiol et GSH a été affinée pour répondre à une concentration physiologiquement pertinente de GSH. [48] ​​RealThiol peut être utilisé pour effectuer des mesures des niveaux de glutathion dans des cellules individuelles à l'aide d'un microscope confocal haute résolution, ainsi qu'être appliqué en cytométrie de flux pour effectuer des mesures en vrac à haut débit.

Une sonde RT ciblée sur les organelles a également été développée. Une version ciblée sur les mitochondries, MitoRT, a été rapportée et démontrée dans le suivi de la dynamique du glutathion mitochondrial à la fois sur un microscope confocal et une analyse basée sur FACS. [49]

Sondes de glutathion à base de protéines Modifier

Une autre approche, qui permet de mesurer le potentiel redox du glutathion à haute résolution spatiale et temporelle dans des cellules vivantes, est basée sur l'imagerie redox utilisant la protéine fluorescente verte sensible au redox (roGFP) [50] ou la protéine fluorescente jaune sensible au redox (rxYFP ). [51] En raison de sa très faible concentration physiologique, le GSSG est difficile à mesurer avec précision. La concentration de GSSG varie de 10 à 50 M dans tous les tissus solides et de 2 à 5 M dans le sang (13 à 33 nmoles par gramme d'Hb). Le rapport GSH-GSSG des extraits de cellules entières est estimé de 100 à 700. [52] Ces rapports représentent un mélange des pools de glutathion de différents états redox de différents compartiments subcellulaires (par exemple plus oxydés dans le RE, plus réduits dans les mitochondries matrice), cependant. Les rapports GSH-GSSG in vivo peuvent être mesurés avec une précision subcellulaire à l'aide de capteurs redox à base de protéines fluorescentes, qui ont révélé des rapports de 50 000 à 500 000 dans le cytosol, ce qui implique que la concentration de GSSG est maintenue dans la plage pM. [53]

Des revues complètes sur l'importance du glutathion dans les maladies humaines ont été publiées régulièrement dans des revues médicales à comité de lecture. [54] [55] [56] [57] [58] [59] [60] [61] [62] [63] Liens de cause à effet indiscutables entre le métabolisme du GSH et des maladies telles que le diabète, la mucoviscidose, le cancer, les maladies neurodégénératives, le VIH et le vieillissement ont été démontrés. Diverses explications ont été proposées pour expliquer pourquoi l'épuisement du GSH est lié au stress oxydatif dans ces états pathologiques.

Cancer Modifier

Une fois qu'une tumeur a été établie, des niveaux élevés de glutathion peuvent agir pour protéger les cellules cancéreuses en conférant une résistance aux médicaments chimiothérapeutiques. [64] Le canfosfamide, un médicament antinéoplasique à base de moutarde, a été modelé sur la structure du glutathion.

Mucoviscidose Modifier

Plusieurs études ont été réalisées sur l'efficacité de l'introduction du glutathion inhalé chez les personnes atteintes de mucoviscidose avec des résultats mitigés. [65] [66]

La maladie d'Alzheimer Modifier

Alors que les plaques bêta-amyloïdes (Aβ) extracellulaires, les enchevêtrements neurofibrillaires (NFT), l'inflammation sous forme d'astrocytes et de microglies réactifs et la perte neuronale sont tous des caractéristiques pathologiques cohérentes de la maladie d'Alzheimer (MA), un lien mécanistique entre ces facteurs n'a pas encore été établi. être clarifié. Bien que la majorité des recherches passées se soient concentrées sur l'Aβ fibrillaire, les espèces oligomères solubles d'Aβ sont maintenant considérées comme ayant une importance pathologique majeure dans la MA. La régulation à la hausse du GSH peut être protectrice contre les effets oxydatifs et neurotoxiques de l'Aβ oligomère. [ citation médicale nécessaire ]

L'épuisement de la forme fermée de GSH dans l'hippocampe peut être un potentiel biomarqueur de diagnostic précoce de la MA. [67] [68]

Vinification Modifier

La teneur en glutathion du moût, première forme brute du vin, détermine l'effet brunissant, ou caramélisant, lors de l'élaboration du vin blanc en piégeant les quinones d'acide caféoyltartrique générées par l'oxydation enzymatique comme produit de réaction du raisin. [69] Sa concentration dans le vin peut être déterminée par spectrométrie de masse UPLC-MRM. [70]

Cosmétiques Modifier

Le glutathion est l'agent le plus couramment pris par voie orale pour tenter de blanchir la peau. [71] Il peut également être utilisé comme crème. [71] On ne sait pas vraiment si cela fonctionne ou non en 2019. [72] En raison des effets secondaires pouvant résulter de l'utilisation par voie intraveineuse, le gouvernement des Philippines déconseille une telle utilisation. [73]


Partie 2 : Neuropathologie de la sclérose en plaques

00:00:12.17 Bonjour à tous, bienvenue dans ma présentation iBiology.
00:00:16.14 Ceci est la deuxième partie d'une série sur la sclérose en plaques et la remyélinisation.
00:00:20.26 La présentation de la partie 1 est donnée par le professeur Mikael Simons de
00:00:26.23 l'Université technique de Munich. Je suis Christine Stadelmann du
00:00:31.13 Institut de neuropathologie de Göttingen, et je suis maintenant dans le suivant
00:00:35.04 présentation va parler de la pathologie de la sclérose en plaques et
00:00:39.11 aussi toutes les perspectives que nous voyons pour la remyélinisation.
00:00:43.06 La SEP est une maladie qui touche environ 2,5 millions de personnes
00:00:52.10 dans le monde. C'est une maladie qui commence normalement à l'âge adulte.
00:00:57.16 Et c'est une pathogenèse assez complexe. Maintenant on le croit
00:01:03.01 qu'il existe une prédisposition génétique à la maladie, mais que
00:01:06.16 il est complété par des facteurs environnementaux. Ces facteurs
00:01:11.02 conduisent ensemble à une réponse immunitaire aberrante ou destructrice
00:01:14.19 qui cible le système nerveux central. En ce qui concerne le
00:01:19.02 prédisposition génétique, nous savons maintenant que les polymorphismes dans
00:01:21.28 les gènes de régulation immunitaire sont pertinents pour la prédisposition
00:01:25.24 pour attraper la maladie. D'autre part, les facteurs environnementaux
00:01:29.25 tels que l'EBV, la vitamine D et le tabagisme affectent le risque d'attirer
00:01:37.28 -- ou contracter la maladie. En ce qui concerne l'évolution de la maladie, la SEP
00:01:44.05 est assez spécial. En cela, il change fondamentalement de visage. Au début,
00:01:50.29 La SEP se présente normalement comme une maladie rémittente avec presque
00:01:55.19 récupération complète entre les rechutes. Cependant, après plusieurs années
00:02:00.26 de la maladie, de nombreux patients, environ 70%, se transforment en un secondaire évolutif
00:02:07.10 phase de la maladie où cette accumulation de capacité se produit essentiellement
00:02:12.02 sans rechutes superposées. Donc en gros, sans apparemment
00:02:16.28 activation immunitaire périphérique. Au contraire, le volume du cerveau change
00:02:24.12 se produisent fondamentalement dès le début. Et c'est avec réduction
00:02:28.29 dans le cerveau, et la diminution peut être un vrai problème en ce qui concerne le
00:02:34.08 développement de la phase secondaire progressive de la maladie.
00:02:37.01 Et la pathologie de la sclérose en plaques ? Voici ce que vous voyez
00:02:42.08 est une section cérébrale fixe avec le périventriculaire très proéminent
00:02:48.12 lésions cérébrales que vous voyez ici. Et ces zones grisâtres
00:02:52.06 sont très proéminents, très clairs, vous les voyez des deux côtés
00:02:55.29 ici. Sur les deux hémisphères du cerveau. Et ceux-ci représentent
00:02:59.10 lésions de sclérose en plaques entièrement démyélinisées. En dehors de cette
00:03:04.14 zone périventriculaire, les autres sites de prédilection sont les nerfs optiques,
00:03:08.17 la zone corticale subpiale à laquelle je reviendrai un peu plus tard, la colonne vertébrale
00:03:13.02 le cordon, le tronc cérébral et aussi le cervelet.
00:03:16.19 Quelles sont maintenant les principales caractéristiques de la pathologie de la SEP ?
00:03:20.10 D'une part, clairement les lésions focales démyélinisées
00:03:24.07 dont nous discuterons en profondeur dans la prochaine minute, mais aussi le
00:03:29.29 la pathologie cérébrale diffuse semble être de plus en plus importante.
00:03:34.08 Surtout avec l'augmentation de la durée de la maladie. Et cela inclut
00:03:39.13 infiltration de lymphocytes T méningée et parenchymateuse, diffuse
00:03:42.10 activation de la microglie, dommages et pertes neuroaxonales, et aussi
00:03:47.02 puis une atrophie cérébrale qui est probablement la cause de tout cela.
00:03:52.26 Donc, dans cette présentation, je me concentrerai principalement sur la lésion focale
00:03:59.08 pathologie observée dans la SEP. C'est une chronique typique
00:04:05.20 lésion démyélinisée, vous voyez la myéline en bleu, vous voyez la
00:04:10.13 lésion démyélinisée en rose, vous voyez aussi que cette lésion est
00:04:15.17 périventriculaire localisé, donc très caractéristique pour un établi
00:04:19.04 Lésion de SP. Vous voyez un bord de lésion très net. tu vois en gros
00:04:24.16 que la lésion est hypocellulaire au centre de la lésion, et vous ne
00:04:28.24 voir accumulation de cellules au bord de la lésion. Donc ça
00:04:34.08 est apparemment plus ou moins une cicatrice avec très peu ou pas
00:04:39.10 activité continue de la maladie. Tout à fait différent de ce que je t'ai montré avant,
00:04:46.06 est cette lésion chronique active ou dite « couchante ». Là juste
00:04:50.13 à l'œil presque nu dans cette diapositive ici, vous voyez qu'il y a un
00:04:55.20 excentration des cellules ici au bord de la lésion autour de ce
00:04:59.28 zone de lésion ici. Et si vous faites de l'immunohistochimie,
00:05:04.18 et regardez la diapositive plus en détail, vous voyez qu'il y a
00:05:07.13 accumulation essentiellement de cellules myéloïdes. des macrophages et
00:05:11.00 microglie activée. Et ce qui est aussi très important, le nucléaire
00:05:14.17 au centre de la lésion, il n'y a pratiquement pas d'activation de la microglie. Aussi non
00:05:18.23 un recrutement de phagocyte est trouvé. Cette activation de la microglie, phagocyte
00:05:26.06 le recrutement, l'activation des cellules myéloïdes, est très accompagné de
00:05:30.20 lésion axonale aiguë. Et l'image que vous voyez ici est juste
00:05:35.10 de cette bordure de lésion. Donc de cette frontière de lésion fumante,
00:05:40.22 avec apparemment une activité démyélinisée résiduelle.
00:05:45.02 Et ce que vous regardez vraiment dans cette immunohistochimie APP
00:05:48.10 est une perturbation du transport axonal, donc vous regardez accumulé
00:05:53.18 APP ici dans les axones. Et ce que nous savons des études animales
00:05:57.06 et des études sur les traumatismes cérébraux, que cette protéine APP y reste pendant
00:06:02.29 environ trois semaines. Donc, fondamentalement, cela signifie que ces axones
00:06:07.13 ont été endommagés ou démyélinisés au cours des trois dernières semaines.
00:06:10.24 Ou cela signifie qu'ils ont des troubles fonctionnels persistants.
00:06:15.17 Et tout cela est bien sûr très pertinent pour notre compréhension de
00:06:19.00 maladie progressive. Et ce n'est qu'une illustration schématique
00:06:24.05 de cette activité de lésion latente. En gros, c'est une marque
00:06:29.07 vraiment de sclérose en plaques et est le type de lésion le plus courant
00:06:33.02 observé chez les patients atteints d'une maladie évolutive. Que dire de la
00:06:38.23 lésion très précoce ? Je veux dire qu'on a rarement la chance
00:06:42.11 voir même des lésions précoces car une SEP typique
00:06:46.11 patient ne subit pas de biopsie cérébrale, bien sûr. Alors toi
00:06:50.02 vraiment voir cela seulement dans certaines circonstances, surtout quand
00:06:54.02 la présentation clinique ou la présentation IRM n'était pas
00:06:58.01 tout à fait clair. Ce que vous voyez ici est la même coloration qu'avant,
00:07:04.08 avec histochimie PAS, et encore la myéline en bleu. Et encore le
00:07:07.19 la lésion est rose. Tu vois une hypercellularité là, tu vois tout ça
00:07:13.28 l'hypercellularité est même augmentée au bord de la lésion. Et si tu
00:07:19.00 faites un peu d'immunohistochimie et vous regardez le macrophage
00:07:21.28 et toute la microglie activée, vous voyez à nouveau clairement accentué
00:07:26.18 le bord de la lésion ici. Encore une fois, parlant pour l'évolution des lésions centrifuges
00:07:34.18 en gros. Mais bien sûr ici dans cette lésion assez précoce, vous voyez
00:07:40.11 également que la lésion est remplie de macrophages au centre de la lésion.
00:07:43.18 En ce qui concerne les astrocytes, vous pouvez voir des astrocytes débutants
00:07:51.04 réaction, astrogliose réactive dans la lésion elle-même, ainsi qu'au
00:07:55.08 bord de la lésion. Et c'est assez important en ce qui concerne l'animal
00:07:59.18 modèle de lésion que je vais vous montrer dans une minute. Cordialement
00:08:02.28 à l'infiltration de lymphocytes T, cela peut être très rare dans cette lésion précoce
00:08:08.22 que je viens de vous montrer. Si vous regardez ici, c'est CD8-positif
00:08:13.23 cellules que nous regardons ici. Si vous regardez les CD3, vous pourriez avoir
00:08:17.04 environ le double du nombre que je montre ici. Donc assez rare.
00:08:21.11 Mais de plus en plus avec l'évolution des lésions. En ce qui concerne
00:08:27.12 notre objectif final dans une remyélinisation des lésions, bien sûr l'évaluation de
00:08:31.23 oligodendrocytes matures, précurseurs d'oligodendrocytes, est très pertinent
00:08:35.26 dans les lésions. Et c'est par exemple ici, une coloration immunohistochimie
00:08:39.25 pour NogoA, pour les oligodendrocytes matures. Et comme il semble, la maturité
00:08:45.24 les oligodendrocytes ne semblent pas être très altérés ici par cette
00:08:51.25 formation de lésions. Vous voyez un peu de réduction ici dans l'actif
00:08:55.19 bord de la lésion, mais pas vraiment. Il semble même que la protéine
00:08:59.16 est régulé à la hausse dans la lésion, par rapport à la substance blanche claire.
00:09:04.04 Ce que nous aimons beaucoup faire dans notre recherche, mais aussi dans le
00:09:11.02 pratique, est de vraiment mettre en scène nos lésions démyélinisées en ce qui concerne
00:09:15.26 à l'activité démyélinisée. Pouvoir comparer les lésions entre patients
00:09:21.02 et aussi des lésions entre différentes maladies. Pour comparer en gros
00:09:25.24 étapes égales de formation des lésions. Ce que nous utilisons aux fins
00:09:29.29 d'une part, la présence de produits de dégradation de la myéline dans
00:09:33.00 macrophages. Nous utilisons des protéines de myéline majeures et mineures et avec le
00:09:37.06 concept selon lequel les principales protéines de la myéline ont besoin de plus de temps pour être
00:09:40.24 digéré. Donc, si vous trouvez encore des protéines de myéline mineures, telles que les MOG,
00:09:44.29 cAMP, MAG, dans les macrophages. Cela indique essentiellement
00:09:48.01 une lésion plus récente. Ce qui s'avère aussi très, très utile
00:09:52.25 sont des marqueurs d'activation des macrophages, tels que MRP14.
00:09:57.08 Cela met vraiment en évidence les monocytes récemment envahis du sang
00:10:02.20 flux. C'est donc un marqueur très utile utilisé pour la détermination de l'âge des lésions
00:10:07.04 dans notre cadre. Quand surviennent quelles lésions ? Quand sont ils
00:10:14.13 le plus important ? Et là je pense que ce qui est très important pour toi c'est
00:10:19.24 que d'une part, les lésions vertes qui sont représentées ici,
00:10:22.07 ce sont les lésions activement démyélinisantes. Ils surviennent dans
00:10:25.29 maladie monophasique, ils se produisent dans la maladie rémittente récurrente,
00:10:29.23 ils se produisent également encore un peu dans les formes de maladies plus chroniques, telles que
00:10:35.10 comme MS progressive secondaire et primaire progressive.
00:10:38.02 Mais dans ces derniers stades de la lésion, c'est vraiment la chronique
00:10:42.22 couvant ou les lésions chroniques actives qui prédominent
00:10:45.25 aussi bien sûr les lésions inactives, dites brûlées. Et
00:10:49.19 également en partie, les plaques d'ombre. Et les plaques d'ombre sont
00:10:52.12 ici vraiment indiqué en rose. Donc juste à titre de comparaison, mon plan ici est
00:11:03.26 pour vous montrer au moins un peu la pathologie des lésions NMO.
00:11:08.05 Pour avoir une comparaison avec la SEP et regarder la myéline
00:11:12.13 pathologie qui peut être différente dans ce contexte clinique. Alors ces
00:11:18.13 sont en fait des coupes de moelle épinière d'un patient atteint de neuromyélite optique.
00:11:23.04 Et juste en regardant ici le LFB/PAS et aussi le macrophage
00:11:27.13 immunohistochimie, vous voyez une énorme lésion dans la dorsale
00:11:31.19 funiculus et aussi de la zone ventrolatérale de la moelle épinière ici.
00:11:36.07 Et rien qu'en regardant la coloration des macrophages, vous pourriez
00:11:40.06 dire qu'à partir de la densité que vous voyez, que le ventrolatéral
00:11:44.02 la lésion est beaucoup plus jeune, beaucoup plus récente. Surtout,
00:11:49.07 en 2004, Vanda Lennon a démontré que NMO,
00:11:53.25 la neuromyélite optique n'est pas une maladie à spectre comme la sclérose en plaques
00:11:58.26 ou une variante de la sclérose en plaques, mais vraiment une maladie complètement différente
00:12:04.01 entité. Et qu'elle a démontré que les anticorps anti-AQP4
00:12:08.10 sont vraiment une signature sérique claire de la maladie. Neuromyélite
00:12:13.28 optica est fondamentalement une maladie caractérisée par la colonne vertébrale et optique
00:12:17.25 atteinte nerveuse. Et bien sûr, tous les patients atteints de ces
00:12:20.29 les signes et symptômes cliniques ont des anticorps anti-AQP4.
00:12:24.22 Mais ceux qui en ont, sont désignés alors auto-immunité anti-AQP4
00:12:31.18 et si vous effectuez un test d'immunofluorescence indirecte dans
00:12:35.19 ces patients. Par exemple sur leur section cérébelleuse, vous
00:12:39.24 voyez exactement ce que je vous montre ici de ce côté. C'est-à-dire que vous voudriez
00:12:43.25 voir une délimitation claire et très agréable et fine de la surface du pial
00:12:49.28 d'une part, et des capillaires, comme on le voit ici à droite
00:12:55.24 section du cerveau. Indiquant qu'avec les anticorps anti-APQ4, vous
00:13:01.14 étiquetez les robots culinaires astrocytes qui se trouvent dans les capillaires du cerveau.
00:13:07.28 Maintenant, sachant qu'une réponse immunitaire anti-astrocyte est fondamentalement
00: 13: 19.11 causal de NMO et en regardant la morphologie de la lésion que vous voyez
00:13:26.07 dans le cerveau, vous vous attendriez probablement à un tout autre
00:13:30.08 type de pathologie. Cependant, en regardant la lésion ici sur le LFB
00:13:34.06 PAS histochimie, vous pourriez vraiment vous tromper de diagnostic
00:13:39.06 et diagnostiquer une lésion SEP. Si vous ne regardez pas assez attentivement.
00:13:43.18 Cependant, aller un peu plus loin et regarder les astrocytes, par exemple,
00:13:48.01 en utilisant l'immunohistochimie GFAP. Vous voyez que les astrocytes ne sont pas
00:13:51.28 généralement détruit au centre de la lésion, vers le bas à droite.
00:13:56.07 Ils sont conservés au bord supérieur gauche ici, où le
00:14:02.18 la matière blanche de la plaque péri est située. Aller plus loin et vraiment
00:14:08.02 pour AQP4 lui-même, vous voyez que cette immunoréactivité est même
00:14:12.07 a encore diminué, par rapport à la protéine de structure GFAP.
00:14:16.23 Encore une fois, comme preuve que les anticorps AQP4 jouent ici un rôle dans le
00:14:23.20 maladie. Si vous regardez ensuite les oligodendrocytes ou matures et
00: 14: 28.12 cellules précurseurs d'oligodendrocytes dans les lésions en utilisant NogoA et
00:14:33.00 Olig2 comme marqueurs, comme nous l'avons fait ici. Vous voyez que les oligodendrocytes
00:14:36.20 sont largement absents de ces lésions aiguës, complètement détruites
00:14:41.22 en raison du processus de formation précoce des lésions chez les anti-APQ4 positifs
00: 14: 46.24 trouble du spectre de la neuromyélite optique. En regardant alors la myéline
00:14:53.23 pathologie protéique d'un peu plus près, vous voyez cette myéline majeure
00:15:00.02 les protéines, telles que MBP et aussi PAP, sont largement préservées
00:15:04.11 dans ces premières lésions. Et vous ne seriez pas facilement diagnostiqué
00:15:08.29 par démyélinisation ici. Alors que si vous regardez MAG ou CMP,
00:15:14.08, vous constaterez une diminution ou une perte totale de ces protéines de la myéline dans la lésion.
00:15:19.16 Donc très révélateur ici d'un processus de démyélinisation pathologique distinct
00:15:27.22 en cours. Et ce qu'on pourrait en conclure, qu'il y a au moins
00:15:32.17 deux principaux mécanismes de démyélinisation. D'un côté,
00:15:36.00 un mécanisme par lequel l'oligodendrocytes souffre d'un
00:15:40.20 dommages causés par la mort des cellules oligodendrogliales. Et la gaine de myéline alors
00:15:44.22 dégénère secondairement. Et d'autre part, la maladie
00:15:49.04 paramètres de circonstances pathologiques, qu'elles soient primaires
00:15:52.23 cible de la réponse immunitaire est la gaine de myéline. Et
00:15:57.20 soit est ensuite éliminé par les macrophages concomitamment avec le
00:16:02.14 oligodendrocytes. Ou encore les oligodendrocytes semblent préservés
00:16:07.02 dans une certaine mesure. Dans la partie suivante, j'aimerais beaucoup
00:16:12.20 pour revenir un peu sur ce que Mika a déjà évoqué,
00:16:18.10 à savoir la progression de la maladie dans la sclérose en plaques.
00:16:21.07 Et c'est certainement l'un des traits caractéristiques de la
00:16:24.20 maladie. Et encore, comme je l'ai déjà dit, très spécial et jusqu'à présent,
00:16:29.22 également énigme non résolue. Et depuis des décennies, les neuropathologistes
00:16:33.29 ont essayé d'établir vraiment la corrélation de la maladie progressive
00:16:38.07 dans leurs documents. Ce qui est très important chez les patients atteints de SEP à un stade avancé, c'est
00:16:44.22 certainement une pathologie corticale. Et là surtout, corticale subpiale
00:16:48.18 démyélinisation, comme indiqué ici avec les flèches. Très caractéristique
00:16:54.05 pour les maladies chroniques, très répandues chez les patients chroniques. Et
00:16:57.23 bien sûr, comme vous le savez peut-être, non détecté par l'IRM.
00:17:02.17 Donc vraiment, échapper à nos corrélations pathologiques cliniques
00:17:07.29 normalement. Mais surtout, ce qu'il faut mentionner, c'est que
00:17:13.16 la démyélinisation corticale n'est pas seulement une caractéristique du stade tardif
00:17:17.07 maladie, mais survient également au début de la maladie et peut même
00:17:21.12 être présent dès le premier épisode de maladie, en gros.
00:17:28.11 Ce qui peut vraiment contribuer à l'importance des maladies chroniques est
00:17:35.25 cependant, cette remyélinisation continue qui est très efficace dans le
00:17:40.19 le cortex peut diminuer avec la durée de la maladie. Et ainsi, partez
00: 17: 46.02 zones corticales subpiales complètement démyélinisées qui sont bien sûr
00:17:50.14 alors très facile à visualiser comme on le voit ici dans cette image.
00:17:56.17 Cette diapositive sert vraiment à deux fins. Donc le schéma de droite sur
00:18:02.17 d'un côté, vous montre l'écart entre la matière blanche
00:18:06.23 démyélinisation en vert, et ici principalement périventriculaire, comme indiqué
00:18:11.04 ici. Et la démyélinisation corticale montrée en orange ici, c'est vraiment
00: 18: 17.08 dépasse le volume de démyélinisation de la substance blanche ici
00:18:21.01 de loin. Par contre, ce qui est aussi facilement visible sur ce
00: 18: 26.16 coupe frontale du cerveau, et principalement vue sur le schéma de la main gauche ici, est la
00:18:31.16 importante atrophie cérébrale que l'on retrouve dans une bonne partie des
00:18:35.23 Les patients atteints de SEP qui commencent également déjà tôt dans la maladie. Et
00:18:40.12 peut-être, un tout premier signe même. Là je pense surtout à
00: 18: 44.19 les données d'IRM sur l'atrophie corticale, comme dans les premiers signes des patients
00:18:51.04 qui se transforme vraiment, vraiment en une maladie progressive secondaire.
00:18:54.13 Quelles sont vraiment les caractéristiques sous-jacentes qui contribuent à cette atrophie
00:19:02.22 du cerveau MS ? Et principalement à l'atrophie corticale. Et là
00:19:07.10 au cours des dernières années, vraiment la notion est apparue en neuropathologie
00:19:12.12 qu'il ne s'agit pas vraiment de dommages neuropathologiques ou de dommages
00:19:17.14 neurones et axones. Ce n'est pas seulement lié aux lésions focales. Et ne
00:19:21.24 sont même bien corrélées avec des lésions focales, mais sont plutôt diffuses
00:19:25.16 phénomène. Et il y a des travaux de Doron Merkler qui
00:19:30.04 contribue. Où ils montrent une perte de la colonne vertébrale dans la sclérose en plaques
00:19:33.17 cortex, indépendant de la démyélinisation focale. Qu'est-ce qui pourrait maintenant
00:19:40.16 la remyélinisation ajoute-t-elle à notre image de la sclérose en plaques ?
00:19:43.28 La remyélinisation dans la SEP est discutée depuis des décennies.
00:19:48.12 Et particulièrement important était John Prineas délimitant
00: 19: 53.02 la morphologie de la remyélinisation dans le cerveau MS, comme indiqué ici
00:19:57.25 dans cet article des Annuals of Neurology, qui montrait très bien
00: 20: 01.04 les axones avec une fine gaine de myéline qui indiquent la remyélinisation
00:20:08.07 ici dans cette plaque MS. Sur le côté gauche, ce que vous voyez vraiment
00:20:12.02 est une plaque d'ombre entièrement remyélinisée. Et je pense que c'est vraiment
00:20:15.25 l'objectif, c'est là que nous aimerions aller. C'est ce que nous
00:20:20.13 aimerait atteindre pour toutes les lésions, pour tous nos patients.
00:20:23.20 Alors faites-les complètement remyéliniser après un certain temps.
00:20:28.04 Cet objectif est-il utile de quelque manière que ce soit ? Et Mikael a déjà
00: 20: 34.28 a discuté du fait que la remyélinisation semble être la plus
00: 20: 38.25 ou est peut-être la thérapie protectrice la plus axonale que nous puissions
00:20:43.01 ont. Cependant, je pense qu'il reste encore du travail à faire
00:20:47.19 pour vraiment le démontrer formellement, en particulier in vivo chez le patient.
00:20:51.11 Nous avons fait un peu de travail dans ce sens, et en montrant ici, par exemple,
00:20:56.16 que la densité axonale est plus élevée dans remyélinisé par rapport à
00:21:00.18 zones de lésions démyélinisées. Cependant, bien sûr, il faut être
00:21:04.26 conscient ici, qu'est-ce que la poule et qu'est-ce que l'œuf.
00:21:07.02 Il se peut aussi que la remyélinisation se produise beaucoup plus
00:21:10.08 facilement dans les zones de lésion qui étaient beaucoup moins endommagées et
00:21:14.22 probablement à un OPC axonal plus élevé et probablement aussi plus élevé
00:21:18.18 densité ici. Mais encore, les zones remyélinisées en général semblent beaucoup
00:21:23.08 mieux que les zones démyélinisées. Qu'en est-il de l'oligodendroglie
00:21:28.22 dont nous avons certainement besoin si nous voulons induire et stimuler
00:21:32.10 remyélinisation ? Sont-ils présents dans les lésions chroniques ? Quand sont ils
00:21:36.20 perdu ? Une partie de ces questions sont encore ouvertes. Et nous avons essayé de
00:21:41.25 se rapprocher de certains de ces aspects dans des travaux récents, où nous avons examiné
00:21:47.24 densité oligodendrogliale dans les lésions corticales démyélinisées. Et où nous
00:21:51.25 a vu que vraiment dans le cadre de la démyélinisation corticale chronique, le
00:21:57.10 Les cellules positives NogoA, ainsi que les cellules positives Olig2, sont allées
00:22:02.22 très bas. Cependant, dans les lésions antérieures, l'oligodendroglie
00:22:07.07 les densités étaient bien meilleures, et même meilleures que la normale.
00:22:13.11 Donc même une stimulation des densités d'oligodendroglie. Cependant,
00:22:18.17 Je pense que nous manquons encore de connaissances sur les modes et aussi sur les
00:22:22.26 le moment de la mort cellulaire. Et probablement nos thérapies ne devraient pas
00:22:27.17 attendez trop longtemps, mais ciblez plutôt des lésions plus précoces si possible.
00:22:35.22 Un grand pas en avant par rapport à notre objectif de stimuler
00:22:42.02 les thérapies pro-remyélinatives sont certainement la détection de la remyélinisation
00:22:47.17 de myéline in vivo. Et là, je pense que ces dernières années, l'important
00:22:52.06 des progrès ont été réalisés avec l'imagerie TEP. Et ceci est une étude par la présente
00:22:58.11 Bruno Stankoff que je montre ici de Paris, qui fait le suivi
00:23:02.10 les patients puis identifie les lésions individuelles et identifie
00:23:06.16 essentiellement la réparation de la myéline, la remyélinisation chez ces patients. Et je pense que cela va
00:23:13.02 être très utile pour l'avenir. D'une part, pour établir
00: 23: 17.17 l'effet protecteur des neurones et des axones de la remyélinisation, et
00:23:22.19 d'autre part, comme une lecture in vivo pour notre pro-remyelinative
00:23:26.18 thérapies. Donc, pour résumer ce que j'ai dit, la SEP est pathologiquement très
00:23:35.06 caractéristique. Il montre une lésion centrifuge caractéristique. Nous devons encore
00:23:41.07 identifier ce qui sous-tend vraiment cette lésion spécifique, ou modèle de lésion
00:23:45.29 formation. De plus, cependant, ils sont essentiellement diffus et non focalisés.
00:23:50.12 pathologie. Et aussi corrélats inflammatoires et non inflammatoires
00:23:54.19 de maladie progressive, et ils ne sont pas encore entièrement compris.
00:23:58.06 Et nous avons vraiment besoin d'en savoir plus pour pouvoir pleinement
00:24:02.13 pour traiter cet aspect de la maladie chez nos patients. Aussi les mécanismes pathologiques
00:24:07.19 des dommages à la myéline et de la mort des oligodendrocytes ne sont pas encore entièrement compris.
00:24:11.05 Et, comme Mika l'a également mentionné, la remyélinisation n'est efficace que dans
00:24:16.23 une petite proportion, environ 20 %, des patients.
00:24:20.26 Donc, j'identifierais clairement comme objectifs de recherche pour améliorer encore
00:24:27.08 notre compréhension de la pathogenèse de la SEP et de l'évolution des lésions.
00:24:30.02 Démontrer également formellement l'effet neuroprotecteur de
00:24:33.29 remyélinisation, idéalement in vivo en utilisant les nouvelles technologies d'imagerie.
00:24:37.28 Et puis aussi du côté de la biologie cellulaire, pour identifier les moyens de
00:24:43.16 protéger et stimuler les OPC dans la SEP en évolution et établie
00:24:48.06 lésions. Sur ce, bien sûr, je tiens à remercier toutes les personnes qui ont contribué
00:24:53.08 ce travail, et vous pour l'écoute. Merci beaucoup.

  • Partie 1 : Myélinisation, remyélinisation et sclérose en plaques

Les patients atteints de leucémie lymphoïde chronique (LLC) qui ont progressé tôt sous ibrutinib développent souvent une transformation de Richter (RT) avec une courte survie d'environ 4 mois. Des études précliniques suggèrent que la voie de la mort programmée 1 (PD-1) est essentielle pour inhiber la surveillance immunitaire dans la LLC. Cette étude de phase 2 a été conçue pour tester l'efficacité et l'innocuité du pembrolizumab, un anticorps humanisé bloquant la PD-1, à une dose de 200 mg toutes les 3 semaines dans la LLC en rechute et transformée. Vingt-cinq patients, dont 16 CLL en rechute et 9 patients RT (tous des lymphomes diffus à grandes cellules avérés) ont été inclus, et 60 % ont reçu auparavant de l'ibrutinib. Des réponses objectives ont été observées chez 4 des 9 patients sous RT (44 %) et chez 0 des 16 patients atteints de LLC (0 %). Toutes les réponses ont été observées chez les patients sous RT qui ont connu une progression après un traitement antérieur par ibrutinib. Après une durée médiane de suivi de 11 mois, la survie globale médiane dans la cohorte RT était de 10,7 mois, mais n'a pas été atteinte chez les patients RT qui ont progressé après un traitement antérieur par ibrutinib. Des événements indésirables de grade 3 ou supérieur liés au traitement ont été signalés chez 15 (60 %) patients et étaient gérables. Les analyses d'échantillons de tumeurs de prétraitement provenant de patients disponibles ont révélé une expression accrue du PD-ligand 1 (PD-L1) et une tendance à l'augmentation de l'expression de PD-1 dans le microenvironnement tumoral chez les patients qui avaient des réponses confirmées. Dans l'ensemble, le pembrolizumab a montré une efficacité sélective chez les patients atteints de LLC avec RT. Les résultats de cette étude sont les premiers à démontrer le bénéfice du blocage de PD-1 chez les patients atteints de LLC avec RT, et pourraient changer le paysage de la thérapie pour les patients RT s'ils sont davantage validés. Cet essai a été enregistré sur www.clinicaltrials.gov sous le numéro NCT02332980.

Le paysage du traitement de la leucémie lymphoïde chronique (LLC) en rechute a changé avec l'introduction de nouveaux inhibiteurs de signal, notamment l'inhibiteur de la tyrosine kinase Bruton ibrutinib, l'inhibiteur PI3Kδ idelalisib et l'inhibiteur du lymphome à cellules B 2 (BCL-2) venetoclax. 1-4 Malgré l'amélioration des résultats cliniques, les patients atteints de LLC continuent de progresser au fil du temps 1 , et les patients LLC qui ont progressé tôt pendant qu'ils recevaient de l'ibrutinib ont souvent développé une transformation de Richter (RT), une transformation en lymphome agressif. À ce jour, les patients atteints de LLC qui ont développé une RT alors qu'ils recevaient de l'ibrutinib ont une survie globale (SG) très courte (∼ 4 mois) 5,6 et cela présente un besoin clinique non satisfait.

Les interactions de la mort programmée 1 (PD-1) avec ses ligands représentent un point de contrôle immunitaire majeur engagé par les cellules tumorales pour surmonter la surveillance immunitaire active des lymphocytes T. Les anticorps monoclonaux humanisés d'immunoglobuline G4 (IgG4) conçus pour bloquer les interactions entre PD-1 et ses ligands ont montré une activité clinique significative dans les tumeurs solides métastatiques 7-12 et le lymphome hodgkinien (HL), 13 mais n'ont pas encore été largement étudiés dans la LLC en rechute ou RT.

Des preuves accumulées ont émergé en ce qui concerne l'expression de PD-1 et de ses ligands dans plusieurs types de non-HL (NHL), y compris la LLC. 14-18 Les cellules T effectrices ou effectrices mémoire épuisées chez les patients atteints de LLC surexpriment PD-1 et sont défectueuses pour former une synapse immunitaire avec les cellules B leucémiques. 19-21 L'incubation d'anticorps bloquant PD-1 avec des cellules T de la LLC restaure la synapse immunitaire normale entre les cellules T périphériques et les cellules leucémiques de la LLC. 19-21 Des données récentes ont révélé que le blocage de la voie PD-1 avec l'anticorps PD-ligand 1 (PD-L1) abrogera la progression de la maladie LLC dans un modèle murin de LLC (transgénique Tcl-1). 22,23 Les données cliniques préliminaires ont montré l'efficacité de l'anticorps PD-1 dans certaines hémopathies malignes, y compris le large BCL diffus (DLBCL) 24,25 et d'autres LNH. 25,26

Compte tenu des données ci-dessus, nous avons émis l'hypothèse que le blocage des interactions de PD-1 avec ses ligands surmonterait l'évasion immunitaire chez les patients atteints de LLC et de RT en rechute. Pour tester cette hypothèse, nous avons mené un essai clinique de phase 2 initié par l'investigateur (#NCT02332980) pour évaluer l'innocuité et l'activité clinique de l'anticorps bloquant PD-1 pembrolizumab dans la LLC en rechute ou réfractaire et le LNH à cellules B de bas grade (folliculaire , zone marginale et lymphome lymphoplasmocytaire). Nous avons également inclus l'utilisation du pembrolizumab dans la RT car ∼ 50 % des patients atteints de RT ont une perturbation de TP53 qui s'associe généralement à une instabilité génomique, 27,28 et les cancers avec des charges de mutations somatiques/une complexité génomique élevées ont tendance à répondre au blocage de PD-1. 29 Ici, nous rapportons les résultats de la cohorte LLC de cet essai de phase 2, y compris les patients atteints de LLC avec RT.


Partie 2 : Cellules souches et tumeurs cérébrales

00:00:01.21 Bonjour. Je m'appelle Alfredo Quinones-Hinojosa. je suis professeur agrégé
00:00:05.21 de neurochirurgie, oncologie, médecine cellulaire et moléculaire et neurosciences
00:00:10.07 à l'Université Johns Hopkins.
00:00:12.11 Aujourd'hui, j'ai le plaisir de vous parler de la question des cellules souches et des tumeurs cérébrales.
00:00:18.11 La question est de savoir s'il y a ou non une cellule
00:00:24.20 qui a donné lieu à un cancer du cerveau,
00:00:29.11 et si cette cellule était ou non une cellule souche neurale normale
00:00:33.10 qui a donné naissance à une tumeur au cerveau,
00:00:36.10 ou s'il y avait ou non une cellule souche de tumeur cérébrale
00:00:40.13 population dans le cancer du cerveau.
00:00:42.21 Et nous allons aller de l'avant et explorer cela.
00:00:45.02 Je vais vous parler un peu de l'histoire.
00:00:47.08 À mon avis, le plus bel organe du corps est le cerveau,
00:00:50.15 et ceci est une reconstruction en 3 dimensions d'une IRM.
00:00:53.05 Et ce que vous ne voyez pas ici
00:00:56.28 est-ce, dans le côté gauche du cerveau, qui est cette zone juste ici --
00:01:01.01 rappelez-vous que l'image est inversée.
00:01:03.20 Nous l'avons fait, ici, vous savez, dans ce cas, étiquetez L pour gauche
00:01:08.29 et vous regardez vous-même ce cerveau, face à face,
00:01:12.00 comme ça. C'est le côté gauche. Sous-jacent à cela,
00:01:15.08 est une tumeur cérébrale très dangereuse,
00:01:18.12 également connu sous le nom de glioblastome multiforme.
00:01:21.12 Il y a plus de 100 ans, Santiago Ramon y Cajal a remporté le prix Nobel de physiologie et médecine
00:01:27.07 parce qu'il a pu contribuer grandement au domaine des neurosciences
00:01:31.27 en examinant les différents types de cellules qui composent le cerveau.
00:01:37.00 Il a dit que nous avions un décret sévère
00:01:40.27 que tout puisse mourir, et que rien ne puisse se régénérer dans le système nerveux central de l'adulte.
00:01:47.08 Il a laissé la possibilité aux maladies pathologiques.
00:01:52.03 Il était pathologiste de formation et est devenu l'un des plus grands neuroscientifiques du monde.
00:01:58.20 Au cours des 30 à 40 prochaines minutes, je vais vous raconter une partie de l'histoire
00:02:04.11 de la controverse sur la neurogenèse adulte,
00:02:06.19 la différence entre la niche des cellules souches humaines et celle des rongeurs --
00:02:13.00 plus précisément, la zone sous-ventriculaire.
00:02:16.09 Je vais vous demander s'il y a ou non des cellules souches trouvées
00:02:21.20 dans le cerveau humain, et si oui ou non
00:02:24.08 il y a des cellules souches trouvées dans le cancer humain.
00:02:29.03 La question qui demeure est de savoir si oui ou non une cellule souche neurale ou une cellule souche
00:02:34.18 peut donner naissance à une cellule souche de tumeur cérébrale, et c'est un travail en cours,
00:02:40.01 et je développerai un peu cela.
00:02:43.11 Qu'en est-il de cette question de la controverse de la neurogenèse adulte ?
00:02:46.20 Eh bien, il s'avère que remontant au début des années 1900,
00:02:51.15 Santiago Ramon y Cajal savait que nous avions des limites technologiques.
00:02:56.07 Il a dit une fois qu'aucune des méthodes utilisées par ces enquêteurs
00:02:59.22 sont capables de distinguer absolument une cellule de névroglie en multiplication
00:03:07.06 d'un petit neurone mitotique.
00:03:10.03 Donc, la question est de savoir s'il y a eu ou non de nouveaux neurones
00:03:13.01 en train de se former dans le cerveau d'un mammifère adulte.
00:03:16.27 Dans les années 1960, Joseph Altman, en réalisant une étude avec des preuves autoradiographiques de thymidine,
00:03:26.26, il a pu trouver de nouveaux neurones chez le rat et le chat adultes.
00:03:33.25 Mais, il faudrait quelques années plus tard, dans les années 1970,
00: 03: 37.12 lorsque Michael Kaplan, il a combiné le marquage à la thymidine
00:03:41.18 et microscopie électronique. Il s'agit de la recherche précoce et de l'utilisation précoce
00: 03: 48.02 de la microscopie électronique qui a confirmé les affirmations d'Altman
00:03:53.16 en montrant des précurseurs neuronaux mitotiques tapissant le ventricule latéral.
00:03:59.05 Mais les gens étaient toujours très sceptiques.
00:04:02.11 C'était assez difficile à comprendre et à croire
00:04:05.26 qu'en effet, de nouveaux neurones sont produits dans le ventricule latéral du cerveau des mammifères.
00:04:11.29 Dans les années 1980, Nottebohm et ses collègues, de New York,
00:04:16.23 étaient, en faisant des études vraiment éloquentes
00:04:20.17 dans le cerveau aviaire, ils ont pu, grâce à une série d'expériences, montrer plusieurs choses.
00:04:27.15 La production de nouvelles cellules avec marquage à la thymidine.
00:04:31.28 Ils ont pu montrer que ces nouvelles cellules n'étaient pas seulement des neurones,
00:04:36.05 mais ils recevaient aussi des synapses.
00:04:38.22 Et surtout, ces neurones qui recevaient des synapses
00:04:42.23 a répondu au son avec un potentiel d'action.
00:04:46.24 Pourtant, les gens étaient très sceptiques sur la question
00:04:52.07 de la neurogenèse dans le cerveau aviaire
00:04:55.14 parce qu'ils ont dit que ce n'était pas le cerveau des mammifères.
00:04:58.10 Ainsi, dans les années 1990, travaillez chez le rongeur,
00:05:01.21 sur plusieurs laboratoires à travers le monde, ils ont commencé à s'effilocher
00:05:06.16 et nous en apprendre plus sur cette question sur la controverse de la neurogenèse.
00:05:11.08 En 1997, un groupe de chercheurs dirigé par le Dr Arturo Alvarez-Buylla,
00:05:17.14 également de New York et par la suite de Californie,
00:05:21.11 a pu élucider l'organisation et la cytoarchitecture
00:05:26.18 de la zone sous-ventriculaire du rongeur.
00:05:29.14 Mais 1999, une découverte très importante qui était également controversée --
00:05:34.23 plusieurs groupes pensant qu'il y avait probablement des cellules épendymaires
00:05:37.28 responsables des neurones. Et Arturo et son groupe,
00:05:42.11 croyant qu'il s'agissait en fait d'astrocytes, ont pu montrer
00:05:46.00 que les cellules souches neurales adultes proviennent en fait des astrocytes du cerveau des rongeurs.
00:05:52.12 Ce qui n'était pas connu à ce stade
00:05:55.29 était de savoir si cela était également vrai pour le cerveau humain.
00:06:00.03 La différence dans cette niche de cellules souches était encore moins connue --
00:06:04.29 la zone sous-ventriculaire -- entre l'humain et le rongeur.
00:06:09.22 Et c'est la prochaine partie de cette discussion.
00:06:12.12 Plusieurs années plus tard, en 2003-2004,
00:06:19.04 comme Arturo et son groupe, et moi-même impliqué dans certaines de ces études,
00:06:23.15 nous avons commencé à percer certains des mystères de l'organisation
00:06:28.28 de la zone sous-ventriculaire humaine.
00:06:31.20 Nous avons commencé à examiner les marqueurs de la migration, dans ce cas,
00:06:35.20 PSANCAM et marqueurs de prolifération, KI67,
00:06:40.15 et marqueurs de précurseurs neuronaux, TuJ1.
00:06:44.14 Et nous avons examiné plusieurs parties du cerveau.
00:06:47.07 C'est la corne antérieure, le corps du ventricule,
00:06:49.19 les autres parties du ventricule, comme vous pouvez le voir,
00:06:53.01 jusqu'à la corne temporale, ici en bas.
00:06:56.07 Et ce que vous pouvez voir, en fait, pas seulement l'organisation
00:07:00.09 était différent -- il y avait des preuves de prolifération, de migration,
00:07:03.20 mais nous avons également trouvé des preuves de la difficulté de certains neurones
00:07:07.18 dans cette zone de la zone sous-ventriculaire,
00:07:10.21 monter et descendre.
00:07:12.18 Ainsi, après de nombreuses années d'examen de l'organisation
00:07:15.12 de la zone sous-ventriculaire des rongeurs, réalisée par de nombreux groupes aux États-Unis
00:07:19.22 et le monde,
00:07:20.10 nous avons commencé à examiner l'organisation de la zone sous-ventriculaire humaine.
00:07:25.05 Et vous pouvez réellement voir ici. en rouge
00:07:27.18 est GFAP, et en bleu est DAPI.
00:07:30.11 Pour la zone sous-ventriculaire du rongeur, vous pouvez réellement voir
00:07:33.22 GFAP en vert, double cortin en rouge et DAPI en bleu.
00:07:38.10 Et puis il y a une illustration de bande dessinée entre la zone sous-ventriculaire humaine
00:07:43.06 et la zone sous-ventriculaire des rongeurs.
00:07:45.17 Dans la zone sous-ventriculaire des rongeurs, non seulement le cerveau est un peu plus
00:07:49.16 lissencéphale en sculpture. Cela signifie qu'il a moins de rainures
00:07:53.18 par rapport au cerveau humain. Mais, dans la zone de la zone sous-ventriculaire --
00:07:57.20 c'est la paroi latérale du ventricule ici.
00:07:59.15 Ceci est une amplification. Vous pouvez réellement voir un groupe de cellules
00:08:03.12 vient de sortir. Également connu sous le nom de flux migratoire rostral.
00:08:07.11 Et ces astrocytes sont complètement soudés contre la zone epyndemal.
00:08:12.16 Pourtant, dans le cerveau humain, il y a la zone épidémique ici,
00:08:16.12 qui s'appelle la couche 1. Ensuite, la couche 2 est une lacune hypocellulaire.
00:08:20.03 Ensuite, la couche 3 est un ruban d'astrocytes.
00:08:23.08 Et puis il y a une transition vers le parenchyme.
00:08:26.15 Différences frappantes entre l'organisation de la zone sous-ventriculaire humaine
00:08:31.04 et la zone sous-ventriculaire des rongeurs.
00:08:34.06 Nous nous sommes donc intéressés à notre laboratoire pour élucider davantage
00:08:37.28 l'organisation de la zone sous-ventriculaire humaine.
00:08:40.20 Nous avons continué à faire ces études très similaires sur le cerveau humain fœtal.
00:08:46.17 Et en effet, il semble que le ventricule latéral puisse également être connecté
00:08:52.00 au flux migratoire rostral, tout en bas
00:08:55.18 contre le bulbe olfactif. C'est un soi-disant
00:08:57.17 coupe sagittale le long de cette région qui est légèrement oblique ici
00:09:02.23 et un peu incliné, comme vous pouvez le voir
00:09:04.04 ici, et nous avons pu étudier différentes régions de cette partie du cerveau,
00:09:09.18 essayant de comprendre comment le cerveau fœtal et le cerveau humain sont organisés
00:09:15.16 par rapport au cerveau de rongeur.
00:09:18.28 Y a-t-il une population de cellules qui migrent ?
00:09:22.09 Il s'avère que nous avons trouvé des preuves qu'en effet
00:09:26.18, certaines cellules semblent migrer en dehors de cette région.
00:09:31.03 Pas nécessairement de la même manière qu'ils semblent migrer dans le cerveau des rongeurs,
00:09:36.07 du ventricule jusqu'au bulbe olfactif,
00:09:39.00 mais en effet certaines de ces cellules semblent migrer en groupes,
00:09:43.06 et ils sont entourés de ces cellules gliales. C'est une microscopie confocale
00:09:47.23 d'une telle région dans le cerveau fœtal humain,
00:09:51.02 et malheureusement, notre groupe n'a pas pu trouver de preuves
00:09:55.19 d'un type similaire de migration dans le cerveau humain
00:09:58.27 en soi, dans le cerveau humain adulte,
00:10:02.09 mais d'autres groupes dans le monde ont affirmé que cela existe bel et bien.
00:10:06.14 Donc la question est, si la migration existe dans le cerveau humain,
00:10:10.05 pourrions-nous apprendre quelque chose sur cette migration
00:10:13.27 qui nous aidera à comprendre pourquoi les tumeurs cérébrales sont si migratrices ?
00:10:18.02 C'est une image que je vais vous montrer d'un petit morceau de cerveau fœtal humain
00: 10: 23.03 qui est mis sur Matrigel, dans lequel vous allez voir des preuves de la migration des cellules
00:10:27.23 entouré de feuilles gliales.
00:10:30.07 Et voici la photo, juste ici. C'est le film.
00:10:32.21 Vous pouvez réellement voir -- c'est de notre propre laboratoire -- les cellules migrent,
00:10:36.21 et voici le cerveau foetal humain.
00:10:38.07 Ils migrent et ils sont encerclés.
00:10:42.05 Et nous avons fait toutes ces immunocolorations pour pouvoir voir qu'en effet,
00:10:45.26 le cerveau fœtal humain peut avoir des similitudes en ce qui concerne la migration
00:10:51.13 par rapport au cerveau de rongeur.
00:10:55.05 Nous avons fait des études similaires, comme vous pouvez l'imaginer, avec des tumeurs cérébrales humaines
00:10:59.15 et nous sommes en train d'essayer de percer certains des mystères
00:11:03.16 que les tumeurs cérébrales humaines utilisent pour la migration.
00:11:07.04 Je t'emmène. Ainsi, nous avons parcouru la controverse de la neurogenèse adulte
00:11:11.26 et je pense qu'il est clair que le cerveau des mammifères a la capacité
00:11:16.00 pour générer des neurones, au moins dans le cerveau des rongeurs.
00:11:18.29 Et des preuves similaires peuvent en fait devenir plus claires
00:11:23.25 dans le cerveau humain adulte.
00:11:26.00 Nous savons que la niche des cellules souches -- dans ce cas la zone sous-ventriculaire --
00:11:30.09 est différent entre l'humain et le rongeur.
00:11:33.04 La question est de savoir s'il existe ou non des cellules souches
00:11:36.09 dans le cerveau humain, et s'il y a ou non des cellules souches dans le cancer humain.
00:11:40.03 Alors, se pourrait-il qu'il existe des cellules souches neurales humaines adultes ?
00:11:45.02 Dans les années 1990, Steve Goldman et ses collègues ont réalisé plusieurs études
00: 11: 49.11 et a publié un article sur la découverte de la neurogenèse adulte
00:11:53.24 de la zone sous-ventriculaire de la corne temporale in vitro.
00: 11: 57.11 C'était à partir de chirurgies de la corne temporale, dans lesquelles ils ont fait des résections du lobe temporal
00:12:04.12 et ont pu cultiver ce tissu et créer des neurones
00:12:07.10 pour la première fois, montrant qu'en effet, au moins dans la boîte de Pétri,
00:12:11.06 c'est possible.
00:12:12.12 Dans les années 1990, Gage et ses collègues ont montré une étude
00:12:16.08 en regardant les cerveaux post-mortem -- ils l'appellent in vivo, mais post-mortem --
00:12:22.08 dans lequel ils ont montré une neurogenèse dans l'hippocampe humain adulte.
00:12:27.11 Et je suis du côté droit de l'hippocampe en ce moment
00:12:29.28 Je montre une image spécifique, et ce que vous pouvez réellement voir
00:12:33.06 ici, dans cette cellule particulière ici qui est marquée
00:12:37.02 avec deux marqueurs -- le rouge est NeuN comme vous pouvez le voir ici
00:12:41.13 et le vert est BrdU, donc cela semble être la formation d'un neurone.
00:12:46.19 Ces patients avaient en fait reçu BrdU pour le traitement d'autres maladies.
00:12:51.29 Ils sont décédés et ce groupe a pu obtenir leur cerveau
00:12:56.09 et faire ces études. Pour la première fois,
00:12:59.01 gelant ces tissus à temps, ils ont pu trouver des preuves de nouveaux neurones
00:13:04.14 en cours de formation dans l'hippocampe humain adulte.
00:13:09.14 Donc, nous nous posons les mêmes questions.
00:13:13.14 En 2004, nous avons demandé -- nous avons publié un article dans lequel nous nous sommes posé les questions :
00:13:18.09 La zone sous-ventriculaire humaine adulte pourrait potentiellement contenir des cellules souches neurales ?
00:13:24.07 Nous avons en fait obtenu les spécimens de la salle d'opération.
00:13:27.22 Nous avons examiné spécifiquement des spécimens de la zone sous-ventriculaire,
00:13:31.08 et nous avons pu former ces belles petites sphères.
00:13:35.11 Nous les appelions des neurosphères.
00:13:37.05 Nous avons purifié ces astrocytes de la zone sous-ventriculaire.
00:13:41.09 Cela signifie qu'à travers une procédure, nous secouons les cellules,
00:13:44.07 et à la fin, dans la boîte de Pétri,
00:13:46.07 nous ne laissons que des astrocytes. Et nous avons pu créer encore plus
00:13:50,25 neurosphères par rapport aux épisodes dans lesquels nous n'avons pas purifié les astrocytes.
00:13:56.23 Et nous avons obtenu des astrocytes du cortex et du striatum.
00:14:01.05 Nous n'avions absolument aucune preuve de la formation d'une sphère,
00:14:04.14 nous disant pour la première fois qu'en effet il doit y avoir quelque chose de particulier
00:14:08.12 dans les astrocytes qui se trouvent dans la zone sous-ventriculaire,
00:14:12.15 car pas seulement quand on les purifie
00:14:15.01 nous trouvons plus de neurosphères, mais
00: 14: 19.02 également lorsque nous avons les mêmes astrocytes ou des astrocytes similaires du cortex et du striatum,
00:14:24.10 nous n'avons trouvé aucune preuve de neurosphères.
00:14:26.17 C'est l'image d'une de ces neurosphères.
00:14:29.26 Et non seulement cela, lorsque nous les avons mis dans un média spécial, nous avons pu former
00:14:35.07 les 3 lignées : dans ce cas, les neurones,
00:14:37.20 dans ce cas les oligodendrocytes, comme vous pouvez le voir ici,
00:14:41.24 et les astrocytes. Ainsi, à partir d'une de ces sphères,
00:14:45.06 de la zone sous-ventriculaire,
00:14:47.05 nous avons trouvé la capacité de ces cellules --
00:14:50.24 c'est une sphère qui provient d'une seule cellule qui était un astrocyte.
00:14:55.08 C'était une cellule GFAP-positive,
00:14:57.25 et nous avons différencié les cellules, nous avons pu produire 3 lignées. Encore une fois,
00:15:03.09 astrocytes, neurones et oligodendrocytes.
00:15:07.11 Mais ce n'était pas suffisant. La question était peut
00:15:10.25 astrocytes humains de la zone sous-ventriculaire
00:15:14.10 produire des neurones sans l'effet des facteurs de croissance ?
00:15:19.06 Donc, ce que nous avons fait ici, c'est de fournir un environnement
00:15:22.19 dans lequel nous utilisons des astrocytes du cerveau humain,
00:15:25.24 et puis nous avons obtenu un astrocyte de la zone sous-ventriculaire,
00:15:30.23 et nous l'avons déposé ici
00:15:32.14 pour voir si, sans mettre des facteurs de croissance exogènes,
00:15:37.06 nous pourrions en fait produire un neurone.
00:15:40.00 Et je suis à l'intérieur d'une de ces expériences, et vous pouvez réellement voir
00:15:42.24 en rouge, un beau neurone formé à partir d'un astrocyte
00:15:48.03 qui a été dérivé de la zone sous-ventriculaire
00:15:50.15 sans l'utilisation de facteurs de croissance.
00:15:52.25 Nous avons essayé de faire la même chose à partir des astrocytes corticaux et striataux,
00:15:57.27 et nous n'avons pas pu produire de neurone.
00:16:00.25 Encore une fois, nous disant qu'il y a quelque chose à propos des astrocytes sous-ventriculaires
00:16:05.25 qui rend ces cellules particulières et capables
00:16:09.25 pour produire des neurones dans le cerveau humain réel.
00:16:13.14 Maintenant, tout cela a été fait dans la boîte de Pétri,
00:16:17.18 et pourtant nous avons pu trouver, pour la première fois,
00:16:21.19 que dans la région du ventricule latéral,
00:16:24.06 comme vous pouvez le voir ici, il y a
00:16:26.04 plusieurs régions -- c'était en fait après avoir étudié beaucoup de spécimens,
00:16:30.29 non seulement de la salle d'opération, mais aussi des tissus post-mortem,
00:16:36.03 nous avons pu trouver que dans le ventricule latéral
00:16:38.25 du cerveau humain, il existe une population spécifique d'astrocytes
00:16:43.23 qui peut donner naissance, non seulement à ces belles sphères,
00:16:47.16 mais aussi aux neurones, aux oligodendrocytes et aux astrocytes,
00:16:51.17 et surtout, même sans facteurs de croissance, nous pouvons réellement
00:16:56.06 produisent un seul neurone.
00:16:58.12 Donc, en effet, il y a une possibilité, jusqu'à présent,
00:17:02.19 ce que nous ne savions pas avant, que le cerveau humain
00:17:05.16 dans la boîte de Pétri, a la capacité de produire des neurones.
00:17:10.03 Donc, il y a probablement une population cellulaire que nous appelons cellules souches
00:17:15.19 dans cette zone de la zone sous-ventriculaire.
00: 17: 18.01 D'autres groupes ont continué à examiner cette population cellulaire au sein de l'hippocampe,
00:17:25.01 et ils continuent de faire avancer ce domaine.
00:17:28.11 Qu'en est-il de la question des cellules souches dans le cancer humain ?
00:17:31.22 C'est quelque chose qui a été évidemment l'un des plus grands défis
00:17:36.17 que nous avons eu, car le cancer est toujours la maladie la plus dévastatrice
00:17:40.29 connu des humains. A mon avis, le plus bel orgue
00:17:45.22 touché par le cancer le plus dévastateur.
00:17:50.04 L'un des problèmes que nous avons, tout d'abord,
00:17:52.24 c'est que nous avons affaire à des tumeurs qui viennent du cerveau,
00:17:56.13 les soi-disant tumeurs intraaxiales.
00:17:58.12 Nous pouvons avoir tout le chemin des gliomes de bas grade (LGG)
00:18:02.03 aux gliomes de haut grade (HGG).
00:18:05.10 Des grades inférieurs aux grades élevés. Ils appartiennent tous à la même famille de cancers.
00:18:09.05 Du bas niveau au haut niveau.
00:18:11.07 Je pense que plus la note est basse, plus la survie du patient est longue.
00:18:15.11 Plus la note est élevée, plus c'est dévastateur pour le patient.
00:18:20.07 Les limitations sont que nous pouvons potentiellement en chirurgie être en mesure de réséquer
00:18:26.19 cette masse que l'on peut voir dans la salle d'opération.
00:18:30.27 Le problème est qu'au moment où ces patients reçoivent le diagnostic de cancer du cerveau,
00:18:35.00 spécifiquement s'il s'agit d'un gliome de haut grade,
00:18:37.23 de nombreuses cellules ont migré jusqu'à la partie controlatérale du cerveau.
00:18:44.19 Et je vous dis que c'est à quel point c'est dévastateur -- c'est un meurtre de masse.
00:18:48.29 Environ 20 000 personnes aux États-Unis sont nouvellement diagnostiquées
00: 18: 54.02 avec le cancer primaire du cerveau.
00:18:57.20 C'est le cancer que je viens de vous montrer.
00:18:59.13 C'est un cancer qui vient spécifiquement du cerveau.
00:19:02.28 Et environ la moitié de ces patients meurent chaque année
00:19:07.08 à cause de ces tumeurs malignes.
00:19:10.06 C'est spécifiquement les gliomes -- c'est le genre de tumeur dont nous parlons.
00:19:15.22 Nous avons examiné ce problème dans notre laboratoire.
00:19:18.13 Vous savez, j'étais intéressé pour essayer de comprendre s'il y avait ou non une relation
00:19:22.18 entre le glioblastome multiforme et le ventricule latéral.
00:19:26.24 Alors, souvenez-vous, nous étudions les ventricules latéraux dans le cerveau humain normal,
00:19:30.04 et nous savons qu'il existe une population potentielle de
00:19:32.19 cellules que nous appelons les cellules souches.
00:19:34.16 Alors, ces cellules souches potentielles peuvent-elles donner naissance à ces tumeurs ?
00:19:38.13 Eh bien, nous devons faire un pas à la fois.
00:19:40.26 Donc, ce que nous avons fait, c'est que nous sommes retournés à notre base de données à Johns Hopkins,
00:19:45.05 et nous avons examiné le pourcentage de survie
00:19:48.28 et les mois, ici, et nous avons examiné deux types de patients :
00:19:53.18 ceux qui impliquaient la zone sous-ventriculaire,
00: 19: 55.27 qui est la ligne sombre ici,
00:20:00.29 comme vous pouvez le voir.
00:20:02.03 Et puis nous avons regardé ces patients qui n'avaient pas d'implication de la zone sous-ventriculaire.
00:20:06.24 Et voici cette ligne pointillée ici.
00:20:09.28 Et nous avons examiné la survie. Ce que nous avons remarqué, ce sont ces patients
00: 20: 13.13 qui ont des tumeurs impliquées dans la zone sous-ventriculaire,
00:20:16.21 c'est ça ici, c'est ce type de tumeur ici,
00:20:20.03 n'a survécu que 8 mois.
00:20:23.17 Par rapport aux patients qui n'avaient pas d'implication de la zone sous-ventriculaire,
00:20:28.10 qui est ce type de tumeur, ici, pas près du ventricule ici.
00:20:32.23 Ces patients ont tendance à survivre 11 mois. Et c'est la courbe de Kaplan-Meier.
00:20:38.01 Donc, pour la première fois, nous donner une idée que potentiellement dans cette zone,
00:20:43.18 il peut y avoir une population qui contribue
00:20:47.08 ou potentiellement à l'origine de certaines de ces tumeurs.
00:20:50.16 C'est encore une hypothèse de travail.
00:20:52.18 L'hypothèse de travail est simple.
00:20:56.00 Comment les tumeurs se forment-elles ?
00: 20: 57.14 Les tumeurs proviennent-elles de la transformation d'une cellule souche neurale
00:21:02.00 ou une cellule progénitrice neurale qui est ensuite transformée
00:21:05.14 dans une cellule souche d'une tumeur cérébrale et ensuite donner naissance à ces tumeurs dévastatrices ?
00:21:10.17 Y a-t-il des altérations épigénétiques et génétiques qui donnent lieu à cette transformation ?
00:21:16.24 Y a-t-il une dédifférenciation potentielle
00:21:20.06 entre un neurone, un astrocyte ou un oligodendrocytes donnant naissance
00: 21: 25.04 à ces cellules progénitrices neurales, ce qui à son tour donne naissance
00:21:29.14 à une cellule souche de tumeur cérébrale ?
00:21:31.21 C'est tout le travail en cours.
00:21:34.13 L'essentiel est que ces tumeurs ici
00:21:37.10 sont en train de se dégrader, et la façon dont nous envisageons maintenant le potentiel
00:21:41.10 étiologie par transformation de cellules souches neurales ou de cellules progénitrices
00: 21: 45.27 donnant naissance à ces cellules souches de tumeurs cérébrales est absolument
00:21:50.12 nous donnant l'espoir que nous en avons besoin potentiellement un jour
00:21:55.02 nous pourrons manipuler le système et avoir un effet positif sur nos patients.
00:22:00.22 Je vous montre, vers 2004, quand nous avons publié notre article
00: 22: 04.20 dans Nature, montrant également que les humains ont dans le ventricule latéral
00:22:08.25 ces cellules souches neurales qui donnent naissance aux neurones
00:22:12.06 contribuant à notre compréhension de la zone sous-ventriculaire humaine.
00:22:16.01 À peu près au même moment, un groupe d'Italie et un groupe du Canada,
00:22:21.16 ils ont montré qu'en effet, lorsque nous obtenons des tissus de
00:22:24.27 la salle d'opération, et nous obtenons les tumeurs, puis nous les cultivons.
00:22:28.23 Les tumeurs, soit sous forme de petites sphères, les soi-disant neurosphères,
00:22:33.23 elles ressemblent exactement aux neurosphères, mais on les appelle des tumorsphères.
00:22:37.14 Ou nous isolons ces cellules sur la base de CD133.
00:22:42.24 Et nous allons de l'avant et remettons soit les sphères, soit les cellules
00:22:47.06 dans le cerveau des rongeurs, ces cerveaux de rongeurs produisent des tumeurs
00:22:52.13 qui ressemble exactement à la tumeur du patient.
00:22:56.03 Et depuis, d'autres groupes (nous inclus)
00:22:59.02 ont en fait dupliqué certaines de ces études.
00:23:01.27 Donc, pour la première fois, nous donnant l'espoir qu'en effet
00:23:06.11 à la fin, potentiellement ces tumeurs peuvent effectivement être étudiées
00:23:13.05 quand nous obtenons le tissu du patient et l'apportons au laboratoire.
00:23:17.22 Donc, pour la première fois, commencer à faire participer nos patients non seulement au diagnostic,
00:23:22.07 mais aussi le traitement potentiel
00:23:24.08 et les faire entrer dans l'histoire.
00:23:26.07 Ces tumeurs ont l'air beaucoup mieux, et elles ressemblent beaucoup mieux
00:23:30.24 la tumeur mère que certaines des lignées cellulaires que nous avons utilisées
00:23:33.26 depuis plusieurs décennies maintenant.
00:23:35.16 Maintenant, il existe des similitudes entre les cellules souches neurales
00:23:39.24 et les cellules souches tumorales cérébrales,
00:23:41.16 depuis les capacités migratoires jusqu'à la signalisation.
00:23:45.12 Et vous pouvez réellement voir certaines de ces similitudes ici.
00:23:48.22 Qu'est-ce qui rend les cellules souches tumorales cérébrales particulières
00:23:52.23 est le fait qu'ils semblent avoir une propagation beaucoup plus à long terme ainsi que
00:23:57.16 double étiquetage phénotypique. Cela veut dire que
00:23:59.10 ils peuvent en fait marquer avec plusieurs marqueurs.
00:24:02.17 Maintenant, c'est potentiellement ce qui nous fait penser que
00:24:08.08 peut-être les cellules souches neurales, elles doivent faire quelque chose avec les cellules souches des tumeurs cérébrales.
00:24:12.15 Encore une fois, c'est une hypothèse de travail que je pense que potentiellement à l'avenir,
00:24:17.11 nous pourrons systématiquement commencer à comprendre un peu plus.
00:24:23.00 Ce que nous savons aujourd'hui, c'est que depuis la zone sous-ventriculaire,
00:24:26.27 à partir de ces astrocytes, nous pouvons former ces sphères, et ces sphères peuvent à leur tour
00:24:32.10 donnent naissance aux trois lignées : neurones, oligodendrocytes et astrocytes,
00:24:36.13 que vous pouvez voir ici.
00:24:38.00 Ce que nous savons aujourd'hui, c'est que si nous obtenons des tissus de la salle d'opération
00:24:43.01 de nos patients, car nous pouvons cultiver une seule cellule
00:24:46.15 dans une sphère, et cette sphère peut finalement retourner dans l'animal,
00:24:51.03 ces tumeurs ressemblent à la tumeur que le patient avait à l'origine.
00:24:56.10 Donc, cela nous donne potentiellement l'opportunité d'avoir une bien meilleure
00:25:00.21 modèle pour étudier le cancer du cerveau, et c'est exactement ce que nous avons fait
00:25:05.14 dans nos collaborations, certains de nos travaux.
00:25:07.13 Et je vais passer en revue quelques-unes de ces études.
00:25:09.09 Par exemple, c'est un article que nous venons de publier il n'y a pas si longtemps,
00:25:13.21 en fait en 2009, où nous avons regardé le Delta/Notch-like
00:25:19.09 récepteur lié au facteur de croissance épidermique.
00:25:21.26 Ce sont des tumeurs dérivées des neurosphères du glioblastome multiforme.
00:25:27.05 Et, comme vous pouvez le voir ici, c'est la tumeur
00:25:30.09 sans traitement. C'est la tumeur avec traitement.
00:25:34.28 Dans ce cas, ici, c'est la valeur de la tumeur, que vous pouvez voir ici.
00:25:39.29 Ce sont les deux groupes différents, et vous pouvez en fait
00:25:42.09 voir des différences significatives.
00:25:44.10 Encore une fois, illustrant le principe que l'on peut rêver de manipuler le système.
00:25:52.23 et commencer très systématiquement à comprendre quels sont les facteurs de croissance, les récepteurs,
00:25:59.06 qui ont une influence sur cette formation tumorale.
00:26:02.15 Je vais vous présenter une autre étude que nous avons réalisée
00: 26: 05.10 c'est la famille Kruppel du facteur de transcription 9,
00:26:10.21 un facteur de transcription associé à la différenciation qui
00:26:14.08 supprime la signalisation Notch I et inhibe les cellules souches initiant le glioblastome.
00:26:20.16 C'est l'image réelle ici. C'est le contrôle.
00:26:23.29 Vous pouvez voir la tumeur massive, semblable à la tumeur du patient,
00:26:28.14 et quand nous traitons ces tumeurs,
00:26:30.18 pour ce facteur en particulier, vous pouvez voir beaucoup moins de formation de tumeurs
00:26:38.16 chez l'animal, dans le modèle du rongeur.
00:26:41.10 Et vous pouvez réellement voir ici, dans cet axe
00:26:45.25 n'est rien d'autre, mais la différence réelle significative entre le contrôle
00:26:50.27 et ceux traités en ce qui concerne la taille de la tumeur ici.
00:26:54.23 Et voici le Kaplan-Meier pour la survie de ces deux groupes.
00:26:59.17 C'est le contrôle et les animaux qui sont traités.
00:27:02.26 Et c'est une différence significative, nous donnant encore une fois
00:27:05.24 l'espoir que nous pouvons apprendre de cette maladie, que nous pouvons apprendre de
00:27:10.13 ces cellules, que ce que nous apprenons de ces cellules ou de ces défunts
00:27:14.29 peut potentiellement un jour être appliqué à nos patients,
00:27:19.06 nous donnant cette vue.
00:27:20.06 Et je vous laisse avec ce dernier papier de PNAS
00:27:23.02 que nous venons de publier il y a quelques mois, dans lequel nous regardons
00:27:26.15 Signalisation c-Met induisant une reprogrammation du réseau
00:27:30.25 et soutenant un phénotype semblable à une tige de glioblastome.
00:27:32.16 Et vous pouvez réellement voir le contrôle -- une très grosse tumeur
00:27:36.04 et ceux traités ici, nous donnant la zone tumorale.
00:27:39.29 La différence entre ces deux là.
00:27:41.27 Encore une fois, pour la première fois, nous donnant la possibilité de manipuler le système.
00:27:46.27 Je pense, maintenant grâce aux études que non seulement notre groupe, mais d'autres groupes dans le monde
00:27:51.18 font sur ces sphères. sur ces sphères tumorales,
00:27:55.20 que lorsqu'elles sont réintroduites dans des animaux, ces tumeurs ressemblent à la tumeur mère,
00:27:59.14 nous pourrons percer les mystères, la signalisation,
00:28:05.05 les caractéristiques de ces tumeurs, et un jour
00:28:07.19, nous pourrons produire de nouvelles thérapies qui auront un effet sur nos patients.
00:28:14.29 Donc, je conclus en vous disant qu'il y a
00:28:18.08 neurogenèse adulte dans le cerveau des mammifères.
00:28:21.18 Il existe une niche de cellules souches, en particulier la zone sous-ventriculaire,
00:28:26.01 qui est différent entre le cerveau humain et le cerveau des mammifères rongeurs.
00:28:30.23 Et c'est en fait une différence très importante, car
00:28:33.16 au fil des ans. pendant des décennies,
00:28:37.03 nous avons continué à étudier la formation de tumeurs
00:28:39.24 dans le cerveau de rongeur -- formation de tumeurs de rongeur dans le cerveau de rongeur.
00:28:45.05 Et je pense que c'est toujours une nécessité de le faire
00:28:48.19 pour continuer à démêler certains des mécanismes communs
00:28:51.01 que le cerveau de rongeur peut avoir avec le cerveau humain.
00:28:53.25 Mais je pense aussi que c'est très, très important
00:28:57.12 que nous continuons à faire de la recherche sur les tissus humains,
00:29:02.20 et c'est parce qu'il y a des différences frappantes entre l'humain et le rongeur,
00:29:08.13 et nous devons essayer de comprendre les deux simultanément.
00:29:12.06 Ils existent. Les cellules souches existent
00:29:17.13 dans le cerveau humain. Nous savons que. Nous l'avons fait nous-mêmes.
00:29:21.24 Autres groupes. Ils existent dans la zone sous-ventriculaire, au moins dans la boîte de Pétri.
00:29:26.03 Ils existent dans l'hippocampe, et c'est quelque chose de très, très important à considérer
00:29:31.04 pour que nous comprenions et utilisions cette capacité
00:29:34.09 pour la future médecine régénérative.
00:29:36.21 Les cellules souches existent également dans le cancer humain,
00:29:40.26 et nous commençons à percer les mystères
00:29:43.12 et les moyens de manipuler ce système actuellement.
00:29:47.23 On ne sait toujours pas si les cellules souches neurales donnent naissance à des tumeurs.
00:29:52.21 Je pense que c'est une hypothèse de travail.
00: 29: 55.28 Ce que l'on sait, c'est une population de cellules dans les tumeurs
00:29:59.18 qui se comportent comme des cellules souches.
00:30:02.02 Et c'est en fait très, très important pour nous de pouvoir comprendre
00:30:06.00 non seulement l'étiologie, mais la progression potentielle du cancer du cerveau.
00:30:11.00 Je pense que l'avenir est radieux,
00:30:14.08 et nous continuerons la quête pour trouver l'étiologie
00:30:19.07 de tumeurs cérébrales, donc potentiellement un jour,
00:30:22.20, nous pourrons trouver de meilleures façons de traiter nos patients.
00:30:28.00 Je vous remercie beaucoup. Je remercie toutes les personnes qui ont soutenu notre travail
00:30:32.02 au fil des ans, y compris le NIH, Howard Hughes,
00:30:35.06 le Maryland State Stem Cell Research Fund.
00:30:39.20 Et surtout, je remercie mon groupe.
00:30:43.14 Il s'agit d'un groupe de jeunes scientifiques qui ont permis
00:30:45.13 m'a appris d'eux et m'a permis de leur enseigner un peu de ce que je sais,
00:30:50.03 et ensemble, nous essayons de donner de l'espoir à nos patients.
00:30:54.01 J'ai le plus beau travail du monde.
00:30:55.17 Chaque jour, je travaille non seulement en tant que chirurgien du cerveau,
00:30:58.02 donner de l'espoir à mes patients en salle d'opération,
00:31:00.25 mais, espérons-le, en leur donnant de l'espoir aussi en dehors de la salle d'opération.
00:31:04.21 Merci beaucoup.

  • Partie 1 : Tumeurs cérébrales

Patients, matériels et méthodes

Les patients

Les patients éligibles étaient séropositifs pour le VIH par Western blot, avaient un lymphome à cellules B agressif (classification de l'Organisation mondiale de la santé), avaient une fonction organique adéquate sauf en cas de tumeur et n'étaient pas traités. 19 Les patients présentant des infections empêchant le traitement ou un lymphome primitif du système nerveux central n'étaient pas éligibles. Les patients ont été inscrits consécutivement entre avril 1995 et août 2000. Le comité d'examen institutionnel du National Cancer Institute a approuvé le protocole et tous les patients ont donné leur consentement éclairé par écrit.

Traitement et évaluation

EPOCH a été administré pendant 6 cycles du jour 1 au jour 5 sous la forme d'une perfusion continue de 96 heures d'étoposide, de doxorubicine et de vincristine (sans bouchon) et de prednisone par voie orale avec du cyclophosphamide le jour 5, comme indiqué dans le tableau 1. Pour réduire l'incidence de toxicité hématologique, la dose de cyclophosphamide au cycle 1 était basée sur le nombre de cellules CD4+ du patient à l'entrée dans l'étude (tableau 1). Par la suite, le cyclophosphamide a été ajusté à la hausse ou à la baisse par incréments de 187 mg/m 2 (dose maximale de 750 mg/m 2 ) pour obtenir un nadir absolu des neutrophiles d'environ 500 cellules/mm 3 . La vincristine a été réduite pour la toxicité comme décrit précédemment. 6,8 Aucun patient n'a reçu de traitement antirétroviral pendant DA-EPOCH. Le traitement antirétroviral a débuté immédiatement après le dernier cycle DA-EPOCH et était conforme aux normes de soins.

EPOCH à dose ajustée

Médicament . Doser. Parcours. Jours de traitement.
Agents infusés*
Étoposide 50 mg/m 2 /jour CIV 1,2,3,4 (96 heures)
Doxorubicine 10 mg/m 2 /jour CIV 1,2,3,4 (96 heures)
Vincristine† 0,4 mg/m 2 /jour CIV 1,2,3,4 (96 heures)
Agents bolus
Cyclophosphamide (cycle 1)
Cellules CD4 + ≥ 100/mm 3 375 mg/m 2 /jour IV 5
CD4 + cellules < 100/mm 3 187 mg/m 2 /jour IV 5
Ajustement de la dose de cyclophosphamide (après cycle 1)‡
nadir ANC > 500/μL ↑ 187 mg au-dessus du cycle précédent
nadir ANC < 500/μL ou plaquettes < 25 000/μL ↓ 187 mg en dessous du cycle précédent
Prednisone 60 mg/m 2 /jour Bon de commande 1,2,3,4,5
Filgrastim 5 g/kg/jour SC 6 → ANC > 5000/μL (ancien nadir)
Cycle suivant§ Jour 21
Médicament . Doser. Parcours. Jours de traitement.
Agents infusés*
Étoposide 50 mg/m 2 /jour CIV 1,2,3,4 (96 heures)
Doxorubicine 10 mg/m 2 /jour CIV 1,2,3,4 (96 heures)
Vincristine† 0,4 mg/m 2 /jour CIV 1,2,3,4 (96 heures)
Agents bolus
Cyclophosphamide (cycle 1)
CD4 + cellules ≥ 100/mm 3 375 mg/m 2 /jour IV 5
CD4 + cellules < 100/mm 3 187 mg/m 2 /jour IV 5
Ajustement de la dose de cyclophosphamide (après cycle 1)‡
nadir ANC > 500/μL ↑ 187 mg au-dessus du cycle précédent
nadir ANC < 500/μL ou plaquettes < 25 000/μL ↓ 187 mg en dessous du cycle précédent
Prednisone 60 mg/m 2 /jour Bon de commande 1,2,3,4,5
Filgrastim 5 g/kg/jour SC 6 → ANC > 5000/μL (ancien nadir)
Cycle suivant§ Jour 21

Les données concernent le cycle 1, sauf indication contraire dans « Ajustement de la dose de cyclophosphamide ». — représente sans objet.

L'étoposide, la doxorubicine et la vincristine peuvent être mélangés dans la même solution. L'étoposide, la doxorubicine et la vincristine ne font jamais l'objet d'un ajustement posologique en fonction de la toxicité hématologique.

La dose de vincristine ne doit jamais être systématiquement plafonnée.

Dose basée sur le nombre absolu de neutrophiles (ANC) du cycle précédent nadir (CBC BIW) dose maximale de cyclophosphamide 750 mg/m 2 .

Commencer le jour 21 si NAN 1000/μL et plaquettes ≥ 50 000/μL.

Dans cette étude, nous nous sommes intéressés à évaluer les effets de l'interleukine 12 (IL-12) sur la reconstitution immunitaire et le contrôle du lymphome. Il a été démontré que l'IL-12 favorise le sous-type fonctionnel TH-1 des cellules CD4+, qui est significativement diminué chez les patients infectés par le VIH. 20,21 In vitro, l'IL-12 restaure certaines fonctions immunologiques déprimées associées au VIH, ce qui suggère qu'une production défectueuse d'IL-12 peut jouer un rôle pathogène dans l'immunodéficience de l'infection par le VIH. 22 L'IL-12 a également montré des effets antitumoraux significatifs dans un système modèle murin qui dépendait des cellules T cytotoxiques CD8. 23 Pour évaluer les effets cliniques de l'IL-12, 20 patients consécutifs ayant obtenu une réponse complète ont été randomisés pour recevoir 300 ng/kg d'IL-12 deux fois par semaine par injection sous-cutanée pendant 3 mois ou sans autre traitement. Des échantillons de sang périphérique ont été prélevés en série pour évaluer la fonction immunitaire. Cette randomisation avait une puissance de 80 % et un α bilatéral = 0,05 pour détecter une différence d'écart type de 1,3 dans les rapports Th-1/Th-2 moyens entre les 2 bras.

La prophylaxie du système nerveux central pour le lymphome, administrée aux 17 derniers patients, était de 12 mg de méthotrexate intrathécal au jour 1 et au jour 5 des cycles 3 à 6. Les patients atteints d'un lymphome du système nerveux central actif ont reçu un traitement selon le paradigme suivant : traitement— intrathécal ou méthotrexate intraventriculaire ou méthotrexate/cytarabine/prednisone deux fois par semaine pendant 2 semaines au-delà de la cytologie négative et de la cytométrie en flux, pour un minimum de 4 semaines de consolidation—une fois par semaine pendant 6 semaines d'entretien—une fois par mois pendant 6 mois. Les patients sans réponse au méthotrexate en monothérapie ont reçu de la cytarabine. La radiothérapie crânienne a été utilisée comme indiqué cliniquement dans les échecs de chimiothérapie. Aucun patient n'a reçu de rayonnement vers d'autres sites. Pneumocystis une prophylaxie de la pneumonie a été administrée pendant DA-EPOCH et interrompue après le traitement si les cellules CD4+ étaient supérieures à 200/mm 3 . Mycobactérie avium une prophylaxie complexe a été administrée aux patients ayant des cellules CD4+ inférieures à 100/mm 3 et interrompue après DA-EPOCH lors de la récupération.

L'évaluation initiale comprenait des tests sanguins de routine, une imagerie cérébrale et corporelle, une biopsie de la moelle osseuse et une ponction lombaire. Une évaluation a été réalisée après les cycles 4 et 6, et après le traitement. Les réponses tumorales étaient conformes aux critères de l'International Workshop. 24 Les paramètres de réponse complète et de réponse complète non confirmée ont été combinés.

Analyses moléculaires et immunohistochimiques

Des analyses immunohistochimiques tumorales ont été effectuées sur des tissus inclus en paraffine disponibles en utilisant des anticorps contre CD20, CD10, MIB-1, bcl-2, bcl-6, p53 (Dako, Carpenteria, CA) et MUM-1/IRF-4 (don de B. Falini). Le virus d'Epstein-Barr (EBV) a été détecté par hybridation in situ contre EBER-1 dans les cellules tumorales. Toutes les analyses immunohistochimiques ont été effectuées dans le Laboratoire de pathologie, National Cancer Institute, et notées comme décrit précédemment par le même chercheur (S.P.). 17

Après déparaffinage, les lames ont été soumises à une procédure de récupération d'antigène (dans 10 mM de tampon citrate, pH 6,0, dans un autocuiseur micro-ondable et passées au micro-ondes pendant 40 minutes à 700 W) et l'immunohistochimie a ensuite été réalisée sur un immunostainer automatisé (Ventana Medical System, Tucson , AZ) selon les instructions du fabricant. p53 était considéré comme positif si plus de 10 % des cellules tumorales présentaient une coloration nucléaire. Une lame de contrôle a été passée avec les cas pour confirmer l'adéquation de la coloration. Pour bcl-2, l'intensité de la coloration a été comparée aux cellules T témoins présentes dans les échantillons de tumeur. Si ce dernier ne tachait pas, le cas était noté comme insatisfaisant. La coloration pour bcl-2 a été notée comme suit : 0, les cellules tumorales étaient négatives, mais les cellules T réactives intercalées étaient positives 1, les cellules tumorales se coloraient plus légèrement que les cellules T 2, les cellules tumorales étaient colorées égales aux cellules T 3, les cellules tumorales étaient colorées plus fortement que T cellules. Les cellules tumorales ont été considérées comme positives pour bcl-2 si elles avaient un score supérieur ou égal à 1. MUM-1 était considéré comme positif s'il y avait plus de 20 % de coloration nucléaire des cellules néoplasiques. 17 La coloration MIB-1 a été notée comme un percentile moyen de 200 cellules tumorales en moyenne sur 3 champs de puissance élevée (hpf 40×), ou dans les cas avec une quantité infime de tissu comme percentile moyen de toutes les cellules néoplasiques et a été rapportée comme 0% à 100%.

Analyses virales et immunitaires

Les charges virales plasmatiques de l'ARNm du VIH-1 ont été obtenues en série, y compris le jour 1 et le jour 6 de chaque cycle chez les 8 premiers patients. Les charges virales ont été mesurées initialement par amplification basée sur la séquence d'acides nucléiques (NASBA), puis par la méthode Roche-Amplicor. 25 Les deux méthodes ont une sensibilité et une plage dynamique similaires. Le génotypage de la transcriptase inverse du VIH-1 a été réalisé en série chez 9 patients comme décrit précédemment. 26

Les sous-ensembles de lymphocytes T ont été déterminés en série par cytométrie en flux.Chez 8 patients, les sous-ensembles CD4 + CD45RO + (engagés) et CD4 + CD45RA + CD62L (naïfs) CD4 + ont été mesurés en série. Pour les patients de la partie IL-12 de l'étude, des cellules mononucléées sanguines ont été obtenues au départ, une fois par mois 3 et 6 à 12 mois après DA-EPOCH pour la production de cytokines stimulée par la phytohémaglutinine (PHA), y compris l'interféron gamma (Biosource International, Camarillo, CA) et l'interleukine 10 (Pierce Endogen, Rockford, IL), à l'aide de kits commerciaux de dosage immuno-enzymatique.

Analyses statistiques

Les probabilités de survie globale et de survie sans progression ont été calculées à l'aide de la méthode de Kaplan-Meier à partir de la date d'étude jusqu'au décès, à la progression due à un lymphome ou au dernier suivi, selon le cas. 27 Les patients ont été censurés pour la survie sans progression du lymphome s'ils développaient une deuxième tumeur maligne ou décédaient sans lymphome. De plus, tous les décès étaient considérés comme des échecs, quelle qu'en soit la cause. La survie sans maladie a été calculée à partir de la date de début de l'étude jusqu'à la progression ou le dernier suivi pour les patients ayant obtenu une rémission complète de la maladie. La signification de la différence entre les paires de courbes de Kaplan-Meier a été calculée en utilisant la procédure de Mantel-Haenszel. 28

La survie sans progression des patients atteints de tumeurs bcl-2-négatives dans la présente étude a été comparée à des patients atteints de tumeurs bcl-2-négatives d'une étude du National Cancer Institute de DA-EPOCH chez des patients séronégatifs pour le VIH avec DLBCL. 8 La comparaison de la distribution des caractéristiques entre les patients de la présente étude et ceux de l'essai précédent de DA-EPOCH a été effectuée soit avec le test exact de Fisher, soit avec le test du chi carré selon le cas, et les résultats sont présentés sans ajustement pour les comparaisons multiples .

Le modèle de risques proportionnels de Cox a été utilisé pour identifier l'effet des facteurs pronostiques avant le traitement sur les résultats et incluait le lymphome du système nerveux central, l'âge, le stade, l'indice de performance de l'Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG), le nombre de sites extraganglionnaires, la lactate déshydrogénase (LDH), le score de l'indice pronostique (IPI) et nombre de CD4 +. 29 Seuls les facteurs associés à une signification statistique marginale ou supérieure (c'est-à-dire P valeur < .05) ont finalement été évalués dans le modèle de Cox. Compte tenu du nombre limité de patients dans cette étude, les modèles de Cox et associés P les valeurs étaient censées être interprétées comme générant des hypothèses et suggérant une ampleur plutôt qu'absolue. Tous P les valeurs sont bilatérales et sont désignées par P2.


Des images obsédantes montrent une femme essayant de combattre son mari voyou avant qu'il ne la jette par la fenêtre du quatrième étage

CETTE séquence obsédante montre une femme essayant désespérément de repousser son mari voyou avant qu'il ne l'étrangle à mort et ne jette son corps par la fenêtre.

L'avocate Tatiane Spitzner aurait été brutalement agressée par son mari dans un ascenseur avant d'être étranglée puis jetée d'un appartement du quatrième étage au Brésil.

La police a publié les images de ses derniers moments au cours desquels elle a été soumise à des niveaux d'agression choquants de la part de Luis Felipe Manvailer.

Jeudi dernier, les enquêteurs médico-légaux ont publié leur rapport concluant que l'avocat n'était pas décédé des suites d'une chute mais avait été étranglé alors qu'il se trouvait dans l'appartement du couple.

Le cadavre ensanglanté et brisé de la victime de 29 ans a été retrouvé dans l'appartement du couple à Guarapuava, dans le sud du Brésil, le 22 juillet.

La police soupçonnait que le professeur de biologie, âgé de 32 ans, avait tué sa femme pendant cinq ans après l'avoir violemment agressée, mais il a affirmé qu'ils se sont disputés et qu'elle est décédée après s'être jetée du balcon de leur appartement.

Leurs découvertes suggèrent que Tatiane a connu une fin violente et a été étranglée à mort alors qu'elle tentait désespérément de se défendre. Les empreintes d'une paire de mains étaient sur sa gorge et l'os hyoïde, situé à l'avant du cou, était fracturé, une blessure généralement associée à l'étranglement.

L'avocate a également subi de multiples fractures au reste de son corps correspondant à une chute de 40 pieds sur un pavage en béton. Selon le rapport, il n'y avait aucune "preuve de réactions chimiques" telles que des traces d'adrénaline et de cortisol dans son corps qui indiqueraient la peur et la conscience de s'effondrer au sol.

Elle était déjà morte au moment où elle a touché le sol, ont déclaré des chercheurs.

Les tests ont également indiqué des taux d'alcoolémie importants dans le sang de la victime "ce qui suggère qu'elle était assez vulnérable", ont déclaré des experts médico-légaux.

Des images de vidéosurveillance capturées dans un parking souterrain et un ascenseur révèlent qu'elle a tenté à plusieurs reprises de s'échapper. Environ 20 minutes après être entré dans leur appartement, le suspect est enregistré en train de monter le corps sans vie de la victime dans l'ascenseur et de nettoyer apparemment les traces de sang sur les murs.

« Notre enquête prouve que la victime a été tuée à l'intérieur de l'appartement par asphyxie et que son corps a été jeté par-dessus le balcon de l'appartement.

"Nous pensons que l'accusé a ensuite pris l'ascenseur jusqu'au rez-de-chaussée et a récupéré le corps de Tatiane, le ramenant à l'appartement dans l'ascenseur", a déclaré le procureur pénal Dunia Rampazzo.

«Nous soupçonnons qu'avant d'être tuée, Luis a soumis sa femme à une période prolongée d'agression physique violente. Ce n'était pas un suicide, mais un fémicide (le meurtre d'une femme par un homme en raison de son sexe). L'agresseur a alors tenté de s'enfuir en voiture.

Les habitants de l'immeuble, qui ont appelé la police après avoir entendu une femme crier à l'aide, ont déclaré avoir vu un homme ramasser le corps de la victime sur le trottoir. Un témoin a raconté l'avoir entendu crier "mon amour, réveille-toi".

La police a affirmé que Manvailer avait admis avoir amené le corps dans l'ascenseur jusqu'à l'appartement. Des images de sécurité le montrent alors en train de fuir les lieux dans une voiture.

Il a été arrêté parce qu'il était soupçonné de meurtre à quelque 185 milles (300 km) de la ville après s'être écrasé sur une autoroute et a affirmé qu'il s'était enfui parce qu'il était «trop dérangé» par «les images de sa femme sautant» pour rester.

Les résultats de l'autopsie arrivent près de deux mois après le crime horrible.

À l'époque, sa mort a provoqué l'indignation nationale et a provoqué un débat à l'échelle nationale sur la violence domestique et la vulnérabilité des femmes dans un pays où 1 133 ont été victimes de féminicide en 2017. Selon le Forum brésilien sur la sécurité publique, l'année dernière, une moyenne sur 530 femmes ont déclaré subir des violences domestiques par jour.

Les experts médico-légaux ont expliqué que l'enquête pénale a pris "plus de 30 jours que prévu car il s'agit d'une affaire compliquée". Trois simulations examinant la dynamique de la chute de l'avocat ont été réalisées depuis l'appartement du quatrième étage où vivait le couple.

L'opération a utilisé une poupée du même poids et de la même taille que la victime qui a été lâchée sous différents angles pour tester diverses possibilités de la façon dont la chute s'est produite.

Un enregistrement angoissant des scènes qui ont précédé la mort de l'avocate donne un aperçu graphique de la violence domestique qu'elle a subie.

Des amis proches de la victime affirment qu'elle a révélé dans une série de textes, envoyés plusieurs mois avant sa mort, qu'elle avait "peur" de son mari qu'elle accusait de l'avoir "maltraitée" et qu'elle voulait divorcer.

Cependant, l'avocat de la défense du mari a fait valoir que le couple avait une relation «heureuse».

Selon certaines informations, le couple était en soirée lorsqu'ils ont commencé à se disputer à propos d'images d'une femme trouvées sur le téléphone de Manvailer.

Des caméras de sécurité dans la copropriété du centre-ville où ils vivaient, ont documenté un compte-rendu coup par coup de l'incident qui a commencé avec une voiture s'arrêtant à l'extérieur du bâtiment.

Des images choquantes montrent le spécialiste des arts martiaux Jiu-jitsu en train de gifler sa femme plusieurs fois au visage dans le véhicule alors qu'elle essaie de le repousser.

La violence écoeurante se poursuit dans le parking souterrain, la victime étant agressée physiquement, frappée à coups de pied, étranglée, poursuivie à travers un parking souterrain et dans l'ascenseur où elle est brutalement battue, maîtrisée et retenue alors qu'elle tente désespérément de s'enfuir.

Ce qu'on ne voit pas, ce sont les 15 minutes de brutalité présumée à l'intérieur de l'appartement du couple. Mais peu de temps après l'arrivée du couple dans leur appartement, un corps plonge au sol à l'extérieur du bâtiment. Des caméras montrent l'accusé en train d'amener le corps de la victime dans l'ascenseur.

Le suspect se tient la tête avec un désespoir apparent. On le voit alors nettoyer des traces de sang sur les parois de l'ascenseur.


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